流式细胞分选服务注意事项-浙江大学肿瘤研究所.PDF

浙江大学肿瘤研究所流式细胞分选实验注意事项 一、仪器简介 BD FACSAria II 流式细胞分选仪，现配备3 个激光器（488nm、633nm 和375nm ），11 个探测器，获 取速度达70,000 细胞/秒，分析速度达50,000 细胞/秒，理论分选纯度大于98%， CV 值小于2.0% ，喷嘴 可选择85mm 或100mm，进样管和收集管可选择12*75mm 流式管或15ml 离心管，可两管或四管分选， 配备BD ACDU 装置，可以在微孔板上定量分选细胞。 二、预约方式与收费标准 影响流式细胞分选成功与否的因素较多，在上机时曾发生荧光抗体选择不正确无法区分、细胞 未处理成单细胞悬液堵塞管路、未做预实验无法找到待分选细胞群等情况，为避免浪费宝贵的样品 和上机时间，请仔细阅读本注意事项，不明之处请联系管理员。 按照研究所规定，请先预缴费用，到账后预约上机，具体流程如下。 1. 校内用户实验流程： （a ） 确定本仪器能否满足实验要求，可使用在线工具SpectrumViewer确定荧光种类是否合适； （b ） 确定预缴费用，由管理员开具“医学院肿瘤学重点学科平台大型仪器有偿服务平台测试清 单”，凭清单去财务处办理转账（5000 元以上请向管理员索取测试报告，10000 元以上需 提供合同）； （c ） 费用到账后联系管理员预约上机时间（提前一周左右）； （d ） 按预约时间上机完成分选，上机人员签三联单确认费用，如超出预缴费用则需开具测试清 单补缴费用，如有结余可用于下次实验。 2. 校外用户实验流程：其他流程同校内用户，发票在到账后联系管理员开具。 3. 取消预约：最迟于预约时段前一天电话取消预约。 4. 上机时间：周一至周五下午1:30-5:00 。 5. 上机地点：杭州解放路88 号浙江大学医学院附属第二医院门诊楼1208 室 6. 联系方式：葛维挺geweiting@zju.edu.cn 0571 杭州解放路88 号浙江大学医学院附属第二医院门诊楼1303 室 7. 收费标准：按《浙江大学大型仪器设备有偿服务管理办法》，流式细胞分选：校内800 元/小时，校外 1200 元/小时。收费由预约时间起，按半小时为单位计。请谨慎预估时间，超时 15 分钟视同放弃上 机。 1 三、特别注意 1. 安全性问题：由于在分选过程中，样本可能通过液滴震荡产生气溶胶，所以 不接受会传播人类病原菌的生物有害样本，也不接受含放射性生物样品。 2. 应知道细胞的大小与形态，以便选择分选用喷嘴。所分选细胞的直径最好小于喷嘴直径的1/5，至少 小于1/3。细胞的形态也会影响了分选的结果，理论上越接近于球形的细胞，分选过程中的剪切力对 细胞造成的伤害就越小。形态特殊的细胞应选择较大的喷嘴，以减轻分选过程对细胞造成的伤害。 各种细胞的建议浓度和所用喷嘴如下表。 Table 1 细胞种类和浓度、喷嘴的选择 细胞种类 浓度 喷嘴 6 Lymphocytes, thymocytes or splenocytes (直径8-12 μm) 8 - 12 × 10 /ml 85μm 6 Activated lymphocytes, smaller cell lines (直径12-20 μm) 7- 9 × 10 /ml 85μm 6 Large adherent cell line (直径20 μm) 5 - 8 × 10 /ml 100μm 3. 荧光染料的选择：如选择1 到4 个荧光标记，一般按如下顺序选择，FITC 、PE 、APC 和PerCP 。 四、样本制备 1. 样本制备基本流程： 获