酵母菌3-磷酸甘油脱氢酶基因（gpd1）的克隆及其在高渗胁迫下mRNA转录水平的差异-微生物学专业论文.docxVIP

华中农业大学2005届硕士学位论文摘要 华中农业大学2005届硕士学位论文 摘要 环境渗透压的变化对于酵母细胞的生存有着十分重要的影响。当酵母菌处于高 渗透压环境中的时候，酵母菌的生存将受到极大的威胁。在这个时候酵母菌可以通 过增加胞内甘油的积累水平来减小细胞膜内外的渗透压差以实现对高渗胁迫的适 应。GPDl是一个由391个氨基酸组成的蛋白质，它能催化磷酸二羟丙酮生成3．磷 酸甘油，在酵母细胞适应高渗透压胁迫的过程中起着重要的作用。高渗胁迫下GPDl 的表达量和它的酶活力都将会有一定程度的上升，而且gpdl基因的突变会直接导致 酵母细胞无法在高渗环境中生长。 本研究选取生产中常用的酵母菌株YY、FHS和WFB，通过实验分析造成三 种酵母菌株抗高渗能力差异的原因。首先分别用浓度为1％、3％、5％的NaCI对酵 母菌株YY、FHS和WFB进行处理比较高渗胁迫对这三个菌株生长速度的影响。 结果发现：在NaCI的浓度为1％和3％时，NaCI对FHS菌株生长速度的影响明显小 于YY和WFB菌株；另外，在NaCI的浓度为1％时，NaCl对YY菌株生长速度的 影响明显小于WFB菌株：当NaCl的浓度为5％时，NaCl对这三个菌株生长速度影 响的强弱依次为WFB、FHS、YY，但差距并不明显。由此可以看出，FHS菌株耐 商渗能力最强、YY菌株次之、WFB菌株最差。 分别克隆酵母菌株YY、FHS和WFB的gpdl基因片段并测序，分析这三个酵 母菌株gpdl基因序列的差异。用生物学软件VectorNTI将YY、FHS和WFBgpdl 基因序列与国际基因库(Gene Bank)中的gpdl序列(X76859)进行对比，发现其 同源性分别为99．32％、 99．83％、99．83％。将这些DNA序列转化为氨基酸序列， 再用Vector NTI比对这些氨基酸序列，结果发现受检菌株YY、FHS gpd2基因序列 对应的氨基酸序列与Gene Bank中gpdl序列(X76859)对应的氨基酸序列完全～ 致，而WFB与它们的同源性只有98．5％。 分别用浓度为1％、3％、5％的NaCl对酵母菌株YY、FHS和WFB进行处理， 比较高渗胁迫对这三个菌株gpdl基因的mRNA转录水平的影响，从gpdl基因的 mRNA转录水平的角度分析造成三个酵母菌株抗高渗能力差异的原因。通过RNA 点杂交显示YY、FHS菌株gpdl基因的mRNA转录水平在NaCI浓度上升时候有上 升的趋势；WFB菌株gpdl基因的mRNA转录水平随NaCl浓度的上升逐渐降低。 实验结果显示，gpdl基因mRNA转录水平与抗高渗能力相关。 关键词：3．磷酸甘油脱氢酶基因 酵母菌 渗透压 华中农业大学2005届颂士学位论文Abstract 华中农业大学2005届颂士学位论文 Abstract The environmental osmotic pressure is a key factor that would affect yeast cell survival· When the environmental osmotic pressure increases，the yeast Saccharornyces cerevisiae’s survival will bc threatened greatly．1nhe cell would accumulate intracellular glycerol which would help yeast adapt hyper·osmotic stress．GPDl is protein with 391 amino acids．It would catalyze the reaction from dihydroxyacetone phosphate to glycerol-3一phosphate，and it play an important role in the hyper—osmotic stress adaption． Hyper-osmotic stresswill increase the expression and transcription of GPDl protein，and mutation on the locus of gpdl gene will lead to lethal effect in hyper-osmotic environment． Three yeast strains of Saccharomyces cerevisiae named YY、WFB、FHS are studied in this article．To reveal how the gpdl gene