酵母组蛋白伴侣Rtt106和人源蛋白伴侣NAC的结构生物学研究-生物化学与分子生物学专业论文.docx

摘要摘要 摘要 摘要 生命的主要遗传物质是DNA。在真核细胞中，DNA围绕一些辅助蛋白有序 地浓缩成紧密堆积的染色体。这些帮助DNA堆积的蛋白叫做组蛋白，DNA围绕 组蛋白形成的基本堆积单位叫做核小体。组蛋白伴侣是一类在组蛋白生成、行使 功能和代谢过程中帮助它们正确转运并完成功能的辅助蛋白。Rttl06是酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae中的组蛋白伴侣，能结合组蛋白H3．H4亚复合体，并在 复制、转录等过程中帮助完成核小体的组装，Rttl06蛋白还在异染色质形成过程 中起到关键作用。 在本文的工作中，我们解析了Rttl06蛋白核心区域的2．5A分辨率结构，并 对其功能机制做了初步探讨。Rttl06的核心区域(Rttl06．M)由两个连续的 pleckstrin homology(PH)结构域紧密结合而成。我们鉴定出在Rttl06的第二个PH 结构域上的一段loop区是与组蛋白H3．H4亚复合体结合的关键区域。除此之外， 我们还首次发现了Rttl06蛋白的核酸结合能力，并找到了其与核酸结合的主要 界面。我们进一步在酵母细胞中用URA3沉默实验证明了Rttl06蛋白的组蛋白 结合和核酸结合能力在异染色质正常形成过程中都是不可或缺的。通过免疫荧光 实验和染色质免疫沉淀实验，我们直接观察并定量检测了Rttl06的组蛋白和核 酸结合能力的丧失对异染色质组成蛋白Sir2在端粒异染色质区定位的影响。 核糖体是合成蛋白的分子机器，它解读RNA中的基因信息并把它们转化成 组成蛋白质的氨基酸序列。新合成的蛋白质以多肽链的形式离开核糖体后时，并 不具有成熟的三维结构，而是需要在一些蛋白分子或复合物的辅助下折叠成有三 维结构并具有生物功能的成熟蛋白质。这一类辅助多肽正确成熟和定位的分子被 称为蛋白分子伴侣(protein molecular chaperone)。新生多肽结合复合物(nascent polypeptide．associated complex，NAC)能与核糖体以1：1的化学计量结合，是新 生态链离开核糖体后结合的第一个分子伴侣。NAC能够帮助新合成的蛋白质J下 确折叠以及调控其正确转运到内质网和线粒体。人源NAC蛋白是由a和B亚基 组成的异源二聚体，其a亚基还单独能形成同源二聚体，在细胞核内具有转录共 激活子的功能。 我们解析了人源NAC复合物参与二体化形成的结构域(NAC结构域)的晶体 结构。在此基础上，我们发现了aNAC亚基(NACA)上的一个新的核酸结合区域。 这个核酸结合区域在NACA同源二聚体中暴露在溶剂中，能够稳定结合核酸， 而在由NAC a和BⅡ矿基(BTF3)组成的异源．一：聚体rfl，这个区域陂BTF3的一段 摘要螺旋区域覆盖，失去核酸结合能力。通过胞内免疫荧光实验观察，我们发现这个 摘要 螺旋区域覆盖，失去核酸结合能力。通过胞内免疫荧光实验观察，我们发现这个 核酸结合区域对NACA同源二聚体在细胞核内的定位有关键作用。这些结果帮 助我们发现了一个NAC亚基之间通过形成不同的二聚体来调节其在细胞内定位 并最终影响功能的机制。NAC蛋白通过形成同源二聚体和异源二聚体来决定行 使蛋白伴侣或转录共激活子的功能，从而在细胞翻译过程和转录过程之间建立了 联系。 关键词：晶体结构组蛋白分子伴侣Rttl06核酸结合异染色质NAC蛋白分子 伴侣同／异源二聚体转录共激活子细胞定位 ABSTRACTABSTRACT ABSTRACT ABSTRACT The basic genetic material of life is DNA．In the eukaryotic cells，DNA is packaged with some proteins to form a compact chromosome．These proteins helping DNA package are called histones and the basic element that formed by DNA and histones is called nucleosome．Histone chaperone is a class of proteins that help histone to correctly translocate and perform their functions during their biogenesis， function and metabolism．Rttl06，a histone chaperone from Saccharomyces cerevisiae， binds histone sub—complex H3一H4，and assists the assembly of