酵母细胞快速进化及截短侧耳素生产工艺的代谢组学研究-制药工程专业论文.docxVIP

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独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的 研究成果,除了文中特别加以标注和致谢之处外,论文中不包含其他人已经发表 或撰写过的研究成果,也不包含为获得 天津大学 或其他教育机构的学位或证 书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中 作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名: 签字日期: 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 天津大学 有关保留、使用学位论文的规定。 特授权 天津大学 可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索,并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。 (保密的学位论文在解密后适用本授权说明) 学位论文作者签名: 导师签名: 签字日期: 年 月 日 签字日期: 年 月 摘 要 在新能源——纤维素燃料乙醇的研究开发过程中,发现由于纤维素原料预处 理产生的复合抑制剂会对发酵菌株的生长及发酵能力产生影响。因此选育出能够 耐受纤维素水解液中复合抑制剂的菌株成为纤维素燃料乙醇研究的重点。对于另 一重要的微生物发酵过程——抗生素工业生产过程,提高菌株的生产发酵性能同 样成为抗生素工业生产过程的研究重点。本实验利用进化手段,得到耐受复合抑 制剂的单双倍体酵母菌株;同样通过对兽用抗生素——泰妙菌素前体截短侧耳素 的工业生产工艺的改进,使生产菌株 Pleurotus mutilus 快速进化出更高的发酵能 力。利用代谢组学手段对两过程中菌株的进化过程进行分析,为后续研究中的菌 株及发酵条件优化提供生物学信息。 对单倍体酵母在复合抑制剂中的传代培养过程研究发现,细胞在复合抑制剂 中的第一代培养过程中,细胞会通过提高延滞期时的碳源代谢活力以抵御对细胞 生长有抑制作用的发酵环境。随着传代培养的进行,细胞的延滞期也随之缩短, 碳源代谢水平也随之降低。通过对单双倍体菌株的比较发现,单双倍体菌株在传 代培养第一代第一个延滞期的代谢特征存在明显差异。双倍体中的氨基酸在传代 培养第一代第一个延滞期取样点,相对含量出现大幅下降;而单倍体则在此时期 相对含量上升,在第二个延滞期取样点相对含量下降。同时糖酵解及三羧酸循环 中间产物在单倍体中的相对含量高于双倍体。以上结果表明单倍体对复合抑制剂 环境更加敏感,需要通过较高的碳源代谢活力产生的能量抵御糠醛、乙酸等抑制 剂的影响,并通过积累更多的胞内代谢物以保持渗透压平衡。 对截短侧耳素两个不同生产工艺过程进行代谢组学分析表明,不同种子期培 养工艺对 P. mutilis 的胞内初级代谢产物,特别是氨基酸以及三羧酸循环中间代 谢物影响明显;同时发现,不同发酵工艺影响 P. mutilis 细胞利用豆油等营养成 分的能力。相比传统的种子培养工艺,以玉米浆为氮源的种子培养过程使细胞具 有更强的碳源、氮源代谢能力,进而在后续的工业发酵过程中 P. mutilis 可对营 养物质更快速的利用,获得更高产量。 关键词:菌株进化;代谢组学;纤维素乙醇;复合抑制剂;工业过程;截短侧耳 素 ABSTRACT In the research and development process of the new energy——fuel ethanol, the combined inhibitors generated during the lignocellulose pretreatment affected the growth and fermentation performance of microorganisms. The breeding of strains that tolerate the combined inhibitors thus became the focus of the study of fuel ethanol. In the industrial production process of antibiotic, another important microbial fermentation process that improved the fermentation performance of industrial strains also became the focus of the antibiotics production process. In this study, we harvested the haploid and diploid yeast strains that tolerated the combined inhibitors by the evolut

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