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原创性声明
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兰州大学
兰州大学 硕士学位论文
中文摘要
禽流感病毒非结构蛋白l(NSl蛋白)全长约为230个氨基酸,理论分子量 约为26KDa,主要包括两个功能结构域,即N一末端的RN^结合结构域和和C一末 端的效应结构域。NSl蛋白是一个多功能的病毒蛋白,它不仅影响着该病毒其他 基因的表达,更能通过与宿主多种细胞因子的相互作用干预宿主细胞的正常功 能,抵抗宿主的抗病毒系统。NSl蛋白因此被认为是禽流感病毒的一个重要毒力 因子。为了寻找与NSl相互作用的其它宿主蛋白以及试图探索NSl的新功能,最 终阐明禽流感的致病性机制,我们利用酵母双杂交系统,以NSl为诱饵蛋白,从 人胸腺cDN^文库中筛到了8个宿主因子可与NSl蛋白相互作用,我们选择U蛋 白作为我们研究的目的蛋白,并作了点对点酵母双杂交回转实验。结果发现两者 确实是互作的,并且互作的部位位于NSl蛋白的RNA结合结构域上。同时我们利 用GST Pull—down进一步验证了二者的相互作用。在研究当中还发现,高致病 性禽流感病毒H5N1亚型NSl蛋白的80-84位氨基酸缺失可能对禽流感的致病性 很重要,这提示针对H5N1型高致病性禽流感病毒可能是一个新的药物靶点。
关键词:禽流感病毒;非结构蛋白;宿主因子;酵母双杂交;
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兰州大学 硕士学位论文
英文摘要
The NSl protein,a non-structural protein of Avian Influenza Virus,is about 230 amino acids in length.Its molecular weight is about 26 KDa.
The protein has two functional domains:an RNA binding domain in the amino
terminal and an effector domain in the carboxyl terminal.As a multifunctional viral protein,the NSl protein can not only influence the expression of other genes of the virus,but also counteract host defense
system by interacting with many cellular proteins.Therefore,the NSl protein is regarded as a crucial virulent factor for Avian Influenza Virus. To find other cellular proteins that interact with NSl,to explore new functions of NSI and then to elucidate the possible mechanism of NSI pathogenicity,a human thymus cDNA l ibrary was screened using yeast two-hybrid system and eight genes were found to interact with NSl.We chose
U protein as our object protein and did yeast point to point back——hybrid to identify its interaction.We also found that U
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