酵母朊蛋白Sup35NM及其变异体体外淀粉样纤维形成动态及其细胞毒性作用-免疫学专业论文.docx

中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院 博上学位论文 缩略语表 (按字母顺序排序) 英文缩写 英文全名 中文全名 A Absorbency 光吸收值 Amp Ampicilin 氨苄青霉素 AP Ammonium persulfate 过硫酸铵 bp Base pair 碱基对 BSA Bovine s嗣Ⅲlm albumin 牛血清白蛋白 CCK，8 Cell Counting Kit-8 CD circular dichroism 圆二色 CPE Cytopathic effcct 细胞病变效应 DMSO Dimcthyl sulphoxide 二甲基亚砜 DTT Dithiothreitol 二硫苏糖醇 EB Ethylene bromide 溴化乙锭 EDTA Enediamine tetraacetic acid 乙二胺四乙酸 E．COH Escherichf coli 埃希氏大肠杆菌 FBS Fetal Serum Bovme 胎牛血清 HRP Horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶 异丙基硫代．B．D半 IPTG Isopropylthio—B·D·gflactoside 乳糖苷 Kan Kanamycin 卡那霉素 KD Kilo Dalton 千道尔顿 McAb Monoclonal antibody 单克隆抗体 NCS New-bome calfserum 新生牛血清 聚丙烯酰胺凝胶电 PAGE Polyacrylamide gel electrophoresis 泳 PBS Phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链反应 Pen Penjcilin 青霉素 ±里墨兰型兰堕苎型垦兰堕塞里±里塑塑墨登查兰茎型堕兰堕 ±里墨兰型兰堕苎型垦兰堕塞里±里塑塑墨登查兰茎型堕兰堕 ．竖主兰些!!：L PrD pfiou inducing domain prion诱导结构域 rpm Rotation per minute 每分钟转数 SDS Sodium dodccyl sulphate 十二烷基磺酸钠 Strep Streptomycin 链霉素 TE 10mmol／L Tris-cl，lmmol／L EDTA Ph 8．0 N，NN’，N’，．四甲基 TEMED NNN’N,-tetra methyl Ethylene diamine 乙二胺 nT Thioflavin T 硫磺素T TdS Thihydroxy methylamino methane 三羟甲基氨基甲烷 、W wild-type 野生型 5．溴．4．氯-3．吲哚 X-gal 5-bromo-4-ehloro-3一indolyl—B-D·galaetoside ．B-D．半乳糖 2 t中目医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院 t中目医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院 博士学位论文 酵母朊蛋白Sup35NM及其变异体体外淀粉样纤维形成 动态及其细胞毒性作用 博士研究生：刘英霞 导 师：洪涛 院士 指导教师：王健伟 副研究员 中国医学科学院基础医学研究所／中国协和医科大学基础医学院 摘要 已发现人类有多种疾病和淀粉样纤维的沉积有关，包括阿尔兹海默病、帕金 森病、可传播性海绵状脑病等。尽管淀粉样变相关蛋白质的氨基酸序列完全不同， 但它们聚集所形成的淀粉样纤维却拥有相同的性质，即：均是高度有序的蛋白聚 集体、呈现细丝状的形态、富含p折叠结构、具有抵抗蛋白酶K消化的能力、 经刚果红(Congo red)染色后在偏振光显微镜下可见黄绿色双折色荧光。因此 对淀粉样纤维过程的研究，不仅有助于阐明淀粉样病变的致病机理，而且有助于 提出相关疾病的有效预防和治疗策略。虽然己对氨基酸序列和淀粉样蛋白形成能 力之间的关系进行了大量研究，但目前淀粉样纤维的形成机制仍不清楚。 1994年，Wickner等提出了酵母Prion这个概念，认为酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae)r扣两个非孟德尔遗传元件lURE3]和[PSr]分别是染色 体编码蛋白Ure2p和Sup35p的朊病毒形式，其行为与哺乳动物PrP相似，因此 为研究淀粉样纤维的形成及Prion构象转变提供了一个较为理想的模型。Sup35p 是翻译终止因子的亚单位，类似予真核细胞释放因子3(eRF3)，通过与Sup45p (eRFl)形成复合物识别终止密码子而使肽链在翻译末端释放，终止蛋白翻译。 Sup35蛋白在酵母体内过表达时蛋白构象发生转变而导致聚集，丧失正常的生理 功能而导致