酵母展示型脂肪酶催化合成辛烯基琥珀酸淀粉酯和糖脂-食品科学专业论文.docxVIP

摘要本文首先对脂肪酶、酵母展示技术、糖脂、辛烯基琥珀酸淀粉酯及其在各行业 摘要 本文首先对脂肪酶、酵母展示技术、糖脂、辛烯基琥珀酸淀粉酯及其在各行业 中的应用等概念作了系统的文献综述，为之后的实验操作奠定理论基础。本实验尝 试采用一株由实验室构建经展示表达脂肪酶的酵母进行催化合成糖酯的研究。 在实验研究部分，首先对全细胞脂肪酶冷冻干燥的保护剂进行了正交优化，得到 复合冻干保护剂，即脱脂乳10％，海藻糖6％，维生素2％，谷氨酸钠1．5％，使得冷干后 的相对酶活可达88．32％；其中冷冻干燥过程的中，脱脂乳对酶活影响最大，其次维生 素C，影响最小的是海藻糖。通过水解活性的测定对全细胞脂肪酶的酶学特性进行考 察发现，其热稳定性良好，在50C保温6h后仍有50％以上的酶活；最适温度和pH值分 别是40(2和pH6．5．同时，分析其酯化和水解的相关性，得出脂肪酶所催化的各种反 应可能共享同一个活性中心。 全细胞脂肪酶在淀粉半固定状态下，可催化辛烯基琥珀酸淀粉酯的合成。糊化的 温度与时间、脂肪酶与0SA的加入量、反应pH值、温度与时间对淀粉酯取代度与反应 效率有不同的影响。基于单因素试验结果，进行正交试验得到酯化最优组合为：吸水 处理15分钟，反应温度40C，脂肪酶和0SA的加入量分别是0．6％和8％，反应时间30分 钟，可制得取代度为0．023的淀粉酯。通过现代分析技术证实，辛烯基琥珀酸基团以 酯键的形式与淀粉分子相连；晶体结构未发生改变；淀粉颗粒的表面结构和形状遭到 严重破坏。合成的辛烯基琥珀酸淀粉酯与原玉米淀粉相比，常温下凝沉性能升高，透 明度增加，乳化稳定性能良好。 全细胞脂肪酶在其他糖脂合成中的应用，分别在叔丁醇与丙酮的溶剂体系中，催 化合成蔗糖月桂酸酯与葡萄糖月桂酸酯，并采用薄层色谱，对反应混合物进行探索性 地初步分离鉴定。分离葡萄糖月桂酸酯的展开剂为：甲苯：乙酸乙酯：甲醇：水一1 0： 40：4．5：1．0时，各组分的Rf值差别均较大，分离效果较好；而分离蔗糖月桂酸酯， 采用文献方法(氯仿：甲醇：冰乙酸：水t81：9：8：2)。较传统化学法合成，显著降低了反 应温度，抑制副产物的生成。且由于脂肪酶牢固地通过化学作用固定于细胞表面，其 操作稳定性及耐热性，重复利用性等都得到了提高。 关键词：脂肪酶酵母展示技术辛烯基琥珀酸淀粉酯糖脂 AbstractThe Abstract The paper systematically reviews the concepts of lipase，yeast surface display, glycolipids，SSOS and their application in various industries for the later theoretical basis of the experimental operation．This study try to lipase-catalyzed synthetize suger esters by the yeast surface display． In the experimental section，firstly the orthogonal optimization of the freeze-dried preservative for the yeast whole cell CALB has been studied．The composite preservative， 1 0％skim milk,6％trehalose，2％vitamin C，1．5％sodium glutamate，Was identified， which Can make the relative activity up to 88．32％after freeze-drying．In the freeze-drying process，the impact of skim milk Was bigger than Vitamin C．The least impact is trehalose．After studying the enzymatic properties of the whole—cell lipase，we found that it had good thermalstability．it remained more than 50％activity at 50C for 6h．The optimum temperature and pH value were 40C and pH6．5．After analyzing the esterification and hydrolysis，it call be inferr