姜黄素对氧化性低密度脂蛋白诱导的内皮细胞迁移能力的影响-内科学(心血管内科)专业论文.docxVIP

重庆医科 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 英文缩写 英文全称 中文全称 Akt protein kinase B 蛋白激酶 B BCA BCA protein measuring kit 蛋白浓度测定试剂盒 CCK-8 cell counting kit-8 CCK-8 试剂盒 DAPI 2-(4-Amidinophenyl)-6- indolecarbamidine dihydrochloride 细胞核蓝色荧光染料 DCFH-DA 2’,7’-dichlorofluorescin diacetate 2,7-二氯荧光黄双乙酸盐 DMSO dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 eNOS endothelial nitric oxide synthase 一氧化氮合酶 FBS fetal bovine serum 胎牛血清 GAPDH glyceraldehyde-3- phosphate dehydrogenase 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 GSH glutathione 谷胱甘肽 HUVECs human umbilical vein endothelial cells 人脐静脉内皮细胞 ICAM-1 intracellular adhesion molecule-1 细胞间粘附分子-1 LOX-1 lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1 NADPH nicotinamide adenine dinucleotide phosphate 凝集素样氧化型低密度脂 蛋白受体-1 还原型烟酰胺腺嘌呤二核 苷酸磷酸 NO nitric oxide 一氧化氮 ox-LDL oxidized low-density lipoprotein 氧化性低密度脂蛋白 PBS phosphate buffer solution 磷酸盐缓冲液 PI3K phosphatidylinositol 3-kinase 磷脂酰肌醇 3-激酶 PMSF phenylmethanesulfonyl fluoride 苯甲基磺酰氟 PVDF polyvinylidene fluoride membrane 聚偏二氟乙烯膜 ROS reactive oxygen species 活性氧 1 SDS sodium dodecyl sulfonate 十二烷基磺酸钠 SDS sodium dodecyl sulfate polyacrylamide-gel 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰 胺凝胶电泳 2 姜黄素对氧化性低密度脂蛋白诱导的内皮细胞迁移 能力的影响 摘 要 目的：研究姜黄素(Curcumin)对氧化性低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein，ox-LDL）诱导的内皮细胞迁移能力的影响，并 探讨其可能的机制。 方法 ： 体 外 培 养 人 脐 带 静 脉 内 皮 细 胞 (Human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)，细胞贴壁生长 24h，HUVECs 融合度在 80% 左右时加入 ox-LDL 建立氧化应激损害模型，观察 curcumin 对细胞迁 移能力的影响。不同浓度的 ox-LDL(0, 10, 20, 40, 80, 160mg/L)处理 HUVECs 24h 后，流式细胞术检测细胞凋亡率。细胞分为 4 组：①正常 对照组：细胞在正常条件下培养；②Curcumin 处理组：（Curcumin, 25μmol/L, 24h）；③ox-LDL 处理组：（ox-LDL, 20mg/L, 24h）；④Curcumin 预处理+ox-LDL 处理组：Curcumin 预处理（25μmol/L, 2h）后，加入 ox-LDL(20 mg/L, 24h)。酶标仪比色法检测总 NO 水平；激光共聚焦显 微镜检测 ROS 含量； Western blot 测定 细胞内 eNOS ，磷酸化 eNOS[p?eNOS(Ser1177)]，Akt，磷酸化 Akt[p?Akt(Ser473)]，ICAM-1 表达水平；细胞迁移实验（Transwell method）观察 HUVECs 迁移数目 的变化。 3 结果：当 ox-LDL 浓度升高到 40 mg/L 时，与正常对照组比较，内 皮细胞存活率下降[(9.59±2.10) % vs (5.05±0.79) % , P0.05]，随着 ox-LDL 浓度的升高，HUVECs 凋亡率增加（P0.01）。与正常对照组 比较，ox-LDL 处理组显著降低细胞内 NO 含量、细胞迁移能力 (0.21 ±