角膜上皮在角膜移植排斥反应中作用的研究-眼科学专业论文.docxVIP

角膜上皮在角膜移植排斥反应中作用的研究 角膜上皮在角膜移植排斥反应中作用的研究 博士学位论文 2003 缩略语 ABBREVIⅡON LASEK Laser-assisted subepithelial keratectomy LGs Langerhans VEGF Vascular endothelial cell growth factor MHC Majorhistocompatibility complex mH Minorhistocompatibility HLA Human leukocyte antigen DH Delayed-type hypersensitivity ACAID Anterior chamber-associated immune deviation PAS Periodic acid Schiff reaction TEM Transmission Electron Microscope 2 角膜上皮在角膜移植排斥反应中作用的研究 角膜上皮在角膜移植排斥反应中作用的研究 博士学位论文 2003 摘要 角膜上皮、基质和内皮这三层角膜主要结构，在角膜移植排斥反应中所起的 作用并不相同。由于角膜中的大部分移植抗原都表达于角膜上皮，因此众多研究 认为上皮在排斥反应的诱导过程中有重要的作用，但由于在角膜移植中刮除供体 上皮并未提高植片的存活时间，这又使人们对上皮在角膜移植排斥反应中的作用 产生了怀疑。明确上皮在排斥反应中的作用，不仅能进一步明确排斥反应的理论， 而且将有利于指导手术方法的改进，为降低排斥反应的发生提供新的思路。在以 往的研究中研究者通过刮除供体上皮减少异基因抗原的含量，但是同时也使基质 丧失了完整上皮的覆盖和保护，所以结果并不完全可靠。本研究借鉴LASEK技术， 对不同酒精浓度和作用时间进行筛选，选定20％酒精浸润中央角膜3．5mm直径 范围lmin，作为制作角膜上皮瓣的安全浓度和时间。在角膜移植术中，首先制 作受体的上皮瓣，并以此瓣覆盖于去上皮的供体植片上，在保证完整上皮覆盖的 条件下对上皮在角膜移植排斥反应中的作用进行了研究。结果发现，供体上皮在 诱导排斥反应中具有重要的作用，保留受体上皮可以明显延长植片的存活时间。 第一部分 不同浓度酒精对大鼠角膜组织损伤作用的研究 目的：研究为制作角膜上皮瓣所选用的不同浓度酒精对角膜组织的可能损伤作 用，指导选择合适的酒精浓度制作安全可靠的上皮瓣。 方法：以近交系Wistar大鼠为对象，进行以下研究：1)15％、20％、30％、40 ％四个不同浓度的酒精分别在大鼠角膜中央3．5ram直径范围内浸润lmin，生理 盐水充分冲洗后取眼球，制作石蜡切片，分别行HE和PAS染色；其中20％、 40％酒精处理lmin后的角膜，还进行透射电镜观察；2)20％酒精分别在大鼠角 膜中央3．5mm直径范围内浸润30s、Imin、2min，生理盐水充分冲沈后取眼球， 制作石蜡切片，分别行HE和PAS染色；3)20％酒精在大鼠角膜中央3．5mm直 径范围内浸润lmin，生理盐水充分冲洗，3d后取角膜分别进行光镜和透射电镜 观察以及角膜郎格罕(Langerhans，LGs)细胞免疫组织化学染色； 4)比较不 同浓度酒精制作上皮瓣的难易程度，选择制作容易而又损伤最小的浓度和作用时 间制作上皮瓣。上皮瓣和去上皮角膜进行HE和PAS染色光镜观察以及透射电镜 观察。 结果：1)不同浓度酒精处理角膜lmin：15％酒精对角膜各层细胞形态米产生明 角膜上皮在角膜移植排斥反应中作用的研究 角膜上皮在角膜移植排斥反应中作用的研究 博士学位论文 2003 显的影响；20％酒精引起表层角膜上皮细胞核浓缩，翼状细胞层和基底层角膜上 皮、上皮基底膜、角膜基质和内皮均未见改变，电镜观察见表层角膜上皮细胞间 连接疏松，有的连接断开，细胞核有浓缩改变，其余结构无明显改变。30％酒精 引起角膜上皮细胞间和上皮下大泡，翼状细胞层核固缩，基底细胞无明显改变， 局限性上皮基底膜破坏，基质和内皮无明显改变。40％酒精引起角膜上皮细胞核 固缩，累及上皮基底细胞，上皮广泛与基质分离，电镜观察角膜}=皮细胞间连接 疏松，表层上皮脱落，可见上皮细胞膜破坏，基底上皮细胞内有空泡结构，基质 和内皮未见明显改变。2)20％酒精处理角膜不同时间：处理30S对角膜各层细 胞形态无明显影响，处理2min见上皮细胞间积水，翼状细胞层细胞核固缩，上 皮基底膜局限性破坏，基质和内皮无明显改变。3)20％酒精处理lmin，3d后角 膜上皮细胞恢复正常，透射电镜观察细胞间连接恢复。免疫组化染色显示LGs细 胞分布与正常无差别。4)15％酒精处理角膜上皮lmin，完整上皮瓣难以制作， 20％及其以上浓度酒糖处理lmin可以较容易