角膜缘移植联合丝裂霉素和血管抑素治疗严重眼表碱烧伤的作用机制分析-解剖学、眼科学专业论文.docxVIP

角膜缘移植联合丝裂霉素 角膜缘移植联合丝裂霉素 和血管抑素治疗严重眼袭碱烧伤的作用机制研究 中文摘要 研究目的 眼表碱烧伤是一静临床常见丽难治的鼹病，角膜移植矮存在因免疫 排斥反应而致手术失败的危险。本研究的目的是；(1)探讨不同浓度的 丝裂霉素、斑管抑索对体外培养的角膜上皮细胞、基质成纤维细胞和血 管内皮细胞的药理和毒理作用，以此来确定丝裂霉索和血篱抑素用于动 物实验和临床研究的最佳用药浓度。(2)在动物模型上，进行角膜移植 米、角膜缘移植术、角膜缘移植术+术中疲用丝裂霉素、角膜缘移植十 术后应用皿管抑索和角膜缘移植术+术中应用丝裂霉素+术后应用血 管稚素等方法治疗，及瑟译佶角膜予缀臆、丝裂霉索、盘管铈素对袋表 碱烧伤术席免疫排斥反应的抑制作用。(3)探讨角膜缘干细胞移植联合 丝袈霉素霹盛管擦索治疗严重疆表碱浇侮瓣漆床疗效，醵较术蘸与术磊 180d时，备指标的变化。 耪搴l}秘方法 (1)细胞体外培养的实验研究：兔角膜上皮细胞、基质成纤维细胞和 入爨警肉皮鳃隐经分离嚣遴牙体势培养、传代，煲至第2代，分缝分魏 接种(96孔板)，其中1孔为作空白用于调零，其余分为7组，培养至 缨貔贴壁矮，进纷如下处联。A缎为对照缀(12魏)，搠DMEM壤养 液；B、C、D组备12孔，分别加入0．1、0．3、O．5mg／ml MMC．DMEM 培养滚，作用5min后，吸出此液，加入DMEM液，E、F、G缎备12 孔，分别加入O．1、0．3、0．599／ml AS—DMEM液，继续培养观察用药后 24h、48h的细胞生长情况，采用MTT法，检测各子L的OD值。计算细 胞增殖抑制率，抑带《率=【(对照缀OD值一实验缀OD德)÷对照缀OD 值1×100％。实验瞧复3次。 (2)严重鼹表碱烧伤的实验研究：在25只兔双限上(用1．0 mol／L NaOH 。1． 溶液1建立眼表碱烧伤模型后编号(1--25号)，碱烧伤后ld，1—10号 溶液1建立眼表碱烧伤模型后编号(1--25号)，碱烧伤后ld，1—10号 兔的左眼行角膜移植术(1组，角膜移植组)、右眼行角膜缘干细胞移 植术(2组，角膜缘移植组)，11—15号兔的双眼行角膜缘移植+术中 应用丝裂霉素f0．25mg／m1)治疗(3组，丝裂霉素组)，16--20号兔双眼 行角膜缘移植+术后应用血管抑素(0．399／m1)治疗(4组，血管抑素组)， 20一25号兔双眼行角膜缘移植+术中应用丝裂霉素+术后应用血管抑 素滴眼液(5组，联合治疗组)；25只兔的50眼术后局部均滴FK506滴眼 液和复方妥布霉素滴眼液，3／d，维持3mon。术后观察半年。观察指标 包括：角膜新生血管、角膜混浊度、角膜水肿度、免疫排斥反应指数、 免疫排斥出现的时间及免疫组织化学检测。 (3)严重眼表碱烧伤的临床应用研究：8例(8眼)严重眼表碱烧伤患 者，行角膜缘干细胞移植术，术中应用丝裂霉素、术后应用血管抑素和 FK一506、复方妥布霉素眼液(联合治疗组)。门诊随访，追踪观察不 少于180d。根据术后术眼的角膜新生血管分级、植片的混浊度、水肿 度来计算移植排斥反应指数(Iu)，同时，观察了角膜的假性胬肉和患 者的自觉症状及检查了患者的视力，并与术前的作了比较。 结果 (1)细胞体外培养的实验研究： l丝裂霉素、血管抑素对角膜上皮细胞增殖的抑制(OD值X士SD) 加药后24h，A、B、C、D、E、F、G组的OD值分别是0．241±O．002、 0．217±O．006、0．178±0．001、0．162±0．007和0．25l±0．001、0．247± O．085、0．249±0．012；其中c、D组的与对照组的比较具有显著性差异 (P=O．00)，B组的与对照组的比较，无显著差异(P0．05)。B、C、D 细胞抑制率分别为9．9％、26．1％、32．9％，E、F、G无抑制作用。 加药后48h，A、B、C、D、E、F、G组的OD值分别是0．862±O．307、 0．186±0．006、0．148±0．023、0．105±0．022和0．703±0．102、0．697± 0．126、0．705±O．202；B、C、D和E、F、G细胞抑制率分别为78．4％、 82．8％、87．8％、18．4％、19．1％、18．4％。MMC各组饵、C、D)与对照 组的比较均具有显著性差异(P=0．00)，细胞的增殖显著下降：AS各 组(E、F、G)之间及与对照组之间，均无显著性差异(PO．05)。 2丝裂霉素、血管抑素对角膜成纤维细胞增殖的抑制(OD值X士SD) ．’． 加药后24h，A、B、C、D、E、F、G组，用MTT法测的OD值分别为0．315±0．038、0．160±0，026、0．179±0．037、0．165±0．023和0．284 加药后24