姜黄素类化合物对镉染毒大鼠肝损伤的干预作用-公共卫生与预防医学专业论文.docxVIP

Intervention of Curcuminoids on Liver Injury Exposed to Cadmium in Rats Dissertation Submitted to North China University of Science and Technology in partial fulfillment of the requirement for the degree of Master of Medicine by Wang Kun (Public Health and Preventive Medicine) Supervisor: Professor Han Gang June, 2015 独 创 性 说 明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的 地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含 为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材 料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了 明确的说明并表示了谢意。 论文作者签名： 日期： 年 月 日 关于论文使用授权的说明 本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保 留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论 文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检 索和交流。 作者及导师同意论文公开及网上交流的时间： □ 自授予学位之日起； □ 自 年 月 日起。 作者签名： 导师签名： 签字日期： 年 月 日 签字日期： 年 月 日 摘 摘 要 华北 华北理工大学硕士学位论文 摘 要 目的 姜黄素类化合物（Curs）主要成分为姜黄素（Cur Ⅰ）、去甲氧基姜黄素 （Cur Ⅱ）和双去甲氧基姜黄素（Cur Ⅲ），实验通过对姜黄的提取，得到姜黄素 类化合物的最佳提取溶剂，再对姜黄素类化合物（Curs）通过柱层析进行分离，得 到分离三种单体的最佳柱层析条件；目前研究中认为镉对机体的毒性主要是氧化损 伤，姜黄素类化合物也被证实具有抗氧化活性，本实验研究的目的在于对其体外的 抗氧化活性进行比较，从抗氧化的角度在分子水平和细胞水平研究姜黄素类化合物 单体对镉染毒大鼠肝脏损伤的干预作用，为姜黄素类化合物在临床和职业镉中毒的 防治及作用机制提供初步的理论依据。 方法 1 姜黄素类化合物的分离纯化：以水、50 %乙醇、70 %乙醇、80 %乙醇、 无水乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸乙酯：乙醇（1：1）9 种常用提取溶剂对 中药姜黄在相同条件下提取，采用高效液相色谱法（HPLC）测定提取液中姜黄 素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素的含量，分析确定最佳提取溶剂；考察柱 层析条件，包括：洗脱剂、填装材料、填装量以及上样量，以得到三种单体的最佳 分离条件。2 体外抗氧化实验：DPPH 法检测姜黄素和双去甲氧基姜黄素的抗氧化 活性并比较活性大小。3 大鼠镉染毒干预实验：大鼠 36 只，随机分为对照组，染 镉组，姜黄素低剂量（25 mg/kg）组，姜黄素高剂量（50 mg/kg）组，双去甲氧基 姜黄素低剂量（25 mg/kg）组，双去甲氧基姜黄素高剂量（50 mg/kg）组。以 2.0 mg/kg 剂量腹腔注射氯化镉（CdCl2），6 次，隔天染，共 12 天；染镉的同时灌胃 给 药 ， 连 续 给 药 6 周 。 检 测 大 鼠 肝 组 织 谷 草 转 氨 酶 （ AST ） 、 谷 丙 转 氨 酶 （ALT）、超氧化物歧化酶（SOD）、胱天蛋白酶 3（Caspase-3）水平及丙二醛 （MDA）含量，苏木素-伊红（HE）染色法观察肝组织病理切片，SPSS17.0 对数 据进行统计分析，描述采用（ x ??s ），P＜0.05 表明结果有显著差异。比较姜黄素 和双去甲氧基姜黄素对镉染毒大鼠肝损伤的干预作用。 结果 1 提取实验显示甲醇对姜黄素类化合物的提取率高于其他溶剂，但从经济和 安全角度考虑，选择 70 %乙醇为提取溶剂；优化得到最佳分离条件为，以硅胶按 柱径高比 1：8 干法装柱，以样品：填装 1：120 湿法上样，氯仿：甲酸（100： 0.7）、氯仿：甲醇：甲酸（99：1：0.7）和（98：2：0.7）为洗脱剂梯度洗脱，分 离得到纯度较高的姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素。2 氧化活性比较 中，姜黄素对 DPPH 的清除率远高于双去甲氧基姜黄素。3 镉染毒实验中，染镉 - I - - - PAGE IV - - - PAGE III - 组大鼠 AST、ALT、Caspase-3 水平及 MDA 含量均显著升高