姜黄素衍生物C213抑制线粒体Hsp90功能及抗白血病的作用-药理学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 目录 中文摘要 5 ABSTRACT 8 常用英文缩写词 9 第一部分前言 10 1. 立题依据 11 2. 研究背景和现状 12 3. 论文研究目标 14 第二部分材料与方法 16 1. 材料 16 1.1 实验仪器 16 1.2 细胞株 16 1.3 主要化学及生化试剂 17 1.4 主要试剂的配制 17 1.5 细胞培养材料 18 1.6 抗体 18 1.7 SDS电泳材料 18 1.8 转移与印迹材料 18 2. 实验方法 19 2.1 细胞的传代、冻存和复苏 20 2.1.1 细胞的传代 20 2.1.2 细胞的冻存 20 2.1.3 细胞的复苏 20 2.2 MTT 法测定体外抗肿瘤细胞作用 21 2.3 线粒体蛋白的提取 21 2.4 流式细胞仪检测 22 2.4.1 细胞周期分布的检测 22 2.4.2 细胞凋亡检测 23 2.4.3 线粒体膜电位的检测 23 2.5 蛋白浓度的测定 24 2.6 免疫共沉淀 25 2.7 蛋白样品的 SDS电泳 26 HYPERLINK \l _TOC_250000 2.8 Western Blotting 26 2.9 统计学处理 27 第三部分实验结果 28 1. C213 对肿瘤细胞增殖的抑制作用 29 2. C213 对白血病细胞中 Hsp90 分子伴侣功能的影响 30 2.1 C213 对热休克相关蛋白表达的影响 31 2.2 C213 对 Hsp90 客户蛋白激酶活性的影响 32 3. C213 诱导白血病细胞进行线粒体凋亡 33 3.1 C213 对白血病细胞线粒体膜电位的影响 34 3.1.1 不同浓度 C213 对线粒体膜电位的影响 34 3.1.2 C213 对白血病细胞短时间作用对线粒体膜电位的影响 35 3.2C213 对 K562 和 HL60 细胞状态分布的影响 37 3.3 C213 对白血病细胞 Caspase 凋亡途径的影响 38 4 C213 对线粒体 Hsp90 的影响 39 5 C213 对白血病细胞周期的影响 42 5.1 C213 对白血病细胞周期调控因子的影响 42 5.2 C213 对白血病细胞周期分布的影响 43 第三部分讨论 44 参考文献 48 综述 54 摘要 目的：研究姜黄素衍生物 C213 干扰线粒体 Hsp90 功能和抗白血病作用。 方法： 1. 利 用 四 甲 基 偶 氮 唑 蓝 （ MTT ） 法 检 测 C213 对 K562 、 HL60 、 MCF-7 、 SMMC-7721、HT-29、SW620、CNE2、SGC7901 和 KB 等肿瘤细胞的增殖抑 制作用。 2. 通过 western blot 法和免疫共沉淀法对比 C213 与姜黄素 Cur 对热休克相关蛋 白和 Hsp90 客户蛋白表达量的影响，来考察 C213 对白血病细胞中 Hsp90 分 子伴侣功能的影响。 3. 采用 JC-1 染色 K562 和 HL60 细胞，应用流式细胞仪来检测 C213 对白血病 细胞线粒体膜电位影响；采用 western blot 方法，考察 C213 对 K562 和 HL60 细胞 Caspase 凋亡途径的影响；采用 Annexin V/FITC 凋亡试剂盒，应用流式 细胞仪检测 C213 对 K562 和 HL60 细胞状态分布的影响。 4. 应用线粒体蛋白提取试剂盒，提取 K562 和 HL60 细胞的线粒体蛋白，用各细 胞器的标志蛋白检测线粒体蛋白的纯度；应用免疫共沉淀法，以 CypD 抑制 剂环孢菌素 CsA 和经典的胞浆 Hsp90 抑制剂为对照，考察 C213 对线粒体蛋 白中 Hsp90-CypD 复合物的影响。 5. 采用 Western blot 法检测 C213 对 K562 和 HL60 细胞周期蛋白因子的影响； 通过 PI 染色，用流式细胞仪检测 C213 对白血病细胞周期分布的影响。 结果： 1. 姜黄素衍生物 C213 在体外能抑制 K562、HL60、MCF-7、SMMC-7721、HT-29、 SW620、CNE2、SGC7901 和 KB 等细胞的增殖，C213 处理肿瘤细胞 48 小 时后，MTT 法测得 IC50 值在 1-10μM 之间，对白血病 K562 和 HL60 的效果 最好，分别为 1.01 和 0.87μM。 2. 用 K562 肿瘤细胞裂解液，对 Hsp90 进行免疫共沉淀，与对照组相比，可引 起与 Hsp90 结合的客户蛋白 Akt 和 P210Bcr-abl 的含量下降。通过 C213（0.5, 1, 2 μM）和 Cur（2.5, 5, 10 μM）分别处理 K562 细胞 24h 后，免疫