姜黄素抑制K562细胞生长并诱导凋亡机制的研究-儿科学专业论文.docxVIP

摘要 摘要 摘要 目的 观察姜黄索诱导人白血病细胞株 K562凋亡作用及其细胞周期的变化，问时 观察其对调亡栩关基因 BCL-XL和BAK表达的影响。探讨姜黄索抑制人白血病细 胞K562生长并诱导凋亡的机制，指导临床白血病的化学药物治疗。 材料与方法 1 细胞培养 以人类白血病细胞株K562 为研究对象。将 K562细胞置于体积分数为 10%的 新生胎牛血清的 RPMI-1640 培养基中 ，37.C 、5%二氧化碳孵箱中培养:取对数 生长期细胞， 0.4%台盼蓝染色，细胞活性在 98% 以上，调整细胞密度为 1xl0 6个 /mL ，0.9ml/孔接种子24孔板进行实验。 2 实验检测 将对照组和经 l OumoVL ，3仇unoVL 、5OumoVL ，100umoVL 的姜黄素干预的 实验细细胞于 24h和48h后分别收集起来，用流式细胞仪检测凋亡率和细胞周期 的变化， RT-PCR方法检测BCL-XL和BAK的mRNA的表达变化，免疫细化法检测 BCL-XL和BAK蛋白的表达. 3 统计学处理 采用SPSS13.0 统计软件处理，数据以均数士标准建(王土 s)表示，经方差齐性 检验后采用单因素方差分析，以 α=0.05为检验水准。 结果 姜黄素可以对 K562 细胞有较明显的增殖抑制作用，且呈剂量依赖与时间依 赖，流式细胞术结果显示荣黄索浓度在 100μM 时作用 24 小时后，凋亡率为 (58.53 土1.08) %，对照组凋亡率为( 1.12土 0.20) %，与对照组相比明显增高 (P0.05); 姜黄索浓度在 100μM 时作用 48 小时后，凋亡率为 (84.70 土 1.53) %，对照组凋亡率为( 1.25士 0.19) %，与对照组相比明显增高 (P0.05); 随 着荣黄素浓度增加，作用于 K562 细胞后可以使其倍增时间明显延长， 01 期细 胞增多， 8期细胞减少 ;RT-PCR 结果显示姜黄索能下调 K562 细胞 BCL-XL mRNA 的表达，上调 BAKmRNA 的表达(P0.05)，免疫组化法发现姜黄素可以降低 BCL-XL 蛋白的表达，升商 BAK 蛋白的表达(P0.05)。 结论 1 美黄素可以诱导 K562 细胞凋亡，且凋亡率望时间和剂最依赖性。 2 荣黄素可以影响 K562 的细胞周期，主要将其阻滞于 01 期。 3 随美黄素浓度的增高，上调了 BAK 的mRNA 和蛋白在 K562 细胞中的表达， 下调了 BCL-XL 的mRNA 和蛋白在 K562 细胞中的表达，可能和 p53 的信号转 导相关。 关键词:姜黄索 k562 细胞 BCL-XL BAK 凋亡 11 Abstarct Abstarct Abstract Objective To investigate the mechanism of Curcumin induced apoptosis of human leuk四nia K562 and its effect on expression of apoptosis gene BCL-XL and BAK . Methods 1 Cell culture In our s阳dy，human 阳ythroleukemia cell line K562 were used as object the K562 cells w町e cultured in the RPMI-1640 medium wi性1 10%(volume 仕action) new-bom calf serum，in 37C ，5% C02 incubator K562 cells in the logar训lmic growth phase，after assessment for cell survival rate over 98% by 位ypan blue，the cell concentration w町e adjusted ωl x 106 /mL，w町e incubated in 24 holes culture plate by 0.9ml/hole . Expennent test K562 Cells were exposed to 0，10，30，50，100 umol/L of Curcumin for 24h and 48h respectively. Then the apoptosis of cells were analyz创 by flow cytometry;ηm BCL-XL and BAK mRNA expression wωquantified by