膜蛋白的表达在无细胞体系中实现功能性表达折叠和组装.PDF

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2018, 45(4): 389~400 蛋白的表达：在无细胞体系中实现 功能性表达、折叠和组装 剑勇 满亚辉 陈 倩 裴 迪 吴文健* ( 防科技大学理学院化学与生物学系，长沙410000) 摘要 膜蛋白在人类和其他物种的生命活动中都起着至关重要的作用 在已完成测序的基因组中，膜蛋白占据30% 药物作 用靶向位点、细胞之间的信号传递以及对外界环境的探测等功能，大多是通过生物膜上的特殊膜受体蛋白实现的 膜蛋白研 究在工业、环境、国防、医学等领域具有重大意 嗅觉受体蛋白是一类典型的膜蛋白，属于G 蛋白偶联受体家族 嗅觉 受体蛋白调控着生物的食物寻找、危险趋避和求偶行为 其主要分布于脊椎动物鼻腔和昆虫触角 嗅觉受体蛋白可以直接识 别气味分子，将生物信号转化为电信号，最终传递至神经中枢，进而做出相关应答 膜蛋白的获取并不容易 天然组织中 的膜蛋白含量太低不足以支撑学术研究 异源表达难以实现膜蛋白整合上膜，这给膜蛋白的结构和功能研究带来很大挑战 无细胞蛋白质合成系统是一个开 体系，且不依赖细胞活性，是体外表达蛋白质的有效方法 通过无细胞蛋白合成体系，在 体外实现膜蛋白二聚体的自组装，将为膜蛋白研究带来全新突破 本文总结了用于无细胞表达的膜蛋白研究进展 关键词 嗅觉受体蛋白，无细胞蛋白质合成系统，膜蛋白，生物传感，信号传导 学科分类号 Q5, Q7 DOI: 10.16476/j.pibb.20 17.0372 露在细胞膜的外在表面，后者包埋于磷脂双层的疏 1 蛋白结构和功能 水区域 整合膜蛋白与膜结合非常紧密，一般只有 [4] 1.1 蛋白分类 表面活性剂或温和变性剂使膜溶解后才可分离出来 . 细胞膜为细胞提供了一把保护伞，不仅保证了 外周膜蛋白表面仅有亲水性氨基酸基团，附着在细 细胞内各种生理反应有序进行，也实现了物质、能 胞膜的内外表面，通过离子键、氢键和磷脂分子的 量和信号的正常传导 大部分功能依靠细胞膜上的 极性头部相结合，或通过与内在蛋白的互相作用， 膜蛋白(membrane proteins，MPs)完成 膜蛋白(图1) 间接与膜结合，因此只要改变溶液的离子强度甚至 是指能够结合或者整合到细胞或者细胞器的膜上的 是提高温度就可以从膜上分离下来，膜结构并不被 蛋白质总称 破坏[3, 5] 脂锚定蛋白是通过共价键被锚定在膜脂的 膜蛋白的分类方法有多种，根据其结构组成， 蛋白质，通常位于脂双层外侧 可分为1 次跨膜结构的简单膜蛋白，以及多次跨膜 1.2 蛋白的功能和研究意义 的复杂膜蛋白，又可据其结构性能特点，分为可溶 膜蛋白功能丰富，参与细胞诸多的重要反应， [1] 包括作为载体将物质转运进出细胞，作为激素的专 性球状蛋白、纤维蛋白和无序蛋白等类型 复杂 [2] 一受体，或者承载着细胞的识别功能，以及负责信 膜蛋白包括受体蛋白、离子通道蛋白、转运蛋白 . 根据与膜结合的程度以及在膜上的定位不同，可以 将膜蛋白分为外周膜蛋白、整合膜蛋白和脂锚定蛋 * 通讯联系人. [3] 白 整合膜蛋白表面兼具有亲水