茭白黑粉菌cAMP及MAPK途径关键基因的克隆及表达分析-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 中图分类 号 Q781； Q786 学校代 码 10356 UDC 577 密级 公开 硕 士 学 位 论 文 MASTER DISSERTATION 茭白黑粉菌 cAMP 及 MAPK 途径关键 基因的克隆及表达分析 Clone and expression analysis of key genes of cAMP pathway and MAPK pathway in Ustilago esculenta 作 者 应荣 导 师 叶子弘 崔海峰 申请学位 理学硕士 培养单位 中国计量学院 学科专业生物化学与分子生物学 研究方向 微生物分子生物学 二〇一四年六月 本研究承蒙 国家自然科学基金和 国家科技支撑计划项目（2012BAD27B）资助 The Present Research Was Supported by The National Natural Science Fund and The national science and technology support program (2012BAD27B) 独创性声明 本人声明 所呈交 的学 位论文是 本人在 导师 指导下进 行的研 究工 作和 取得的研 究成果 ，除 了文中特 别加以 标注 和致谢之 处外 ，论文 中不包含 其 他人已经 发表或 撰写 过的研究 成果 ，也不 包含为获 得 中国计量学院 或 其他教育 机构的 学位 或证书而 使用过 的材 料。与我一 同工作 的 同志对本 研 究所做的 任何贡 献均 已在论文 中作了 明确 的说明并 表示了 谢意 。 学位论文 作者签 名： 签字日期 ： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论 文作者 完全 了解 中国计量学院 有关保 留、使用 学位论 文的规定 。特授 权 中国计量学院 可以将学位 论文的 全部 或部分内 容编 入有关数 据库进 行检 索，并采 用影印 、缩 印或扫描 等复制 手段 保存、汇 编 以供查阅 和借阅。同 意学校向 国家有 关部 门或机构 送交论 文的 复印件和 磁 盘。（保 密的学 位论 文在解密 后适用 本授 权说明） 学位论文 作者签 名： 导师签 名： 签字日期 ： 年 月 日 签字日期 ： 年 月 日 致 谢 本文是在 导师叶 子弘 教授，崔海峰 副教授 的精心指 导和悉 心关 怀下完 成的。我 由衷地 感谢 我的两位 恩师在 科研 中给我的 指导和 帮助 。学术上 ， 老师渊博 的专业 知识 ，严谨的 治学 态度，精益求精 的工作 作风 ，让我终 身 难忘 ，必将终身受益；生 活中 ， 老师 关心 学生 ，平 易 近人 的人 格魅 力对 我 影响深远 。值此论文完成之际，谨向恩师表示衷心的感谢和崇高的敬意。 在学习和研究期间，生命科学学院的俞晓平、付贤树、郝培应、王雪艳、 马正、申屠旭萍、陈春、许益鹏等，你们对学生的奉献精神，勤奋严谨的治学 精神，忘我的工作精神令我受益无穷。特别感谢师兄金荣愉、时鹏涛，师弟言 思敏、胡鹏、李帅，师妹金晔、余佳佳以及刘俊平、刘卫平、马艳、陈相波、 陆雯、薛承美、张新亭、康天舒、郑敏和 11 级的其他同学，在生活和学习中对 我的关心和帮助。 感谢我的家人和朋友，你们的鼓励与支持，是我力量的源泉。 最后，谨向 所有关 心 、支持和帮 助我的 领 导、老师、同 学和朋 友表示 再次的感 谢，同时向 参加论文 评阅 、评议 及答辩委 员会的 专家 、教授表 示 诚挚的感 谢！ 应荣 2014 年 6 月 茭白黑粉菌 cAMP 及 MAPK 途径关键基因的克隆及表达分析 摘要：茭白是我国第二大水生蔬菜，广泛栽培于长江流域及以南地区，具有重 要的经济效益。茭白的孕茭与其内生真菌茭白黑粉菌的侵染互作关系密切，茭 白黑粉菌的菌丝形态是决定茭白商品性和食用价值的关键因素。厚垣孢子充满 茎部的灰茭严重影响茭白的经济价值。蛋白质组学和表达谱分析表明 PKA 和 MAPK 关键酶在酵母型和菌丝型茭白黑粉菌中差异表达 PKA，它们积极参与了 菌丝形成及玉米黑粉菌等真菌从酵母型向菌丝型转变的过程。 本研究以分离自“龙茭 2 号”正常茭和灰茭的茭白黑粉菌为研究材料，利 用分子生物学和生物信息学等研究了茭白黑粉菌 cAMP 途径关键基因（UePka） 及 MAPK 途径关键基因（UeErk、UeMkk、UeSsk）的基因结构、不同碳源下的 表达差异及基因之间的互作。结果如下： 一、茭白黑粉菌 UePka、UeErk、UeMkk、UeSsk 基因的克隆及序列分析 根据转录组测序结果设计了茭白黑粉菌 UePka、UeErk、UeMkk、UeSsk 基 因的引物，反转录 PCR 获得各基