姜黄素联合FAPα疫苗对黑色素瘤的影响及其机制探讨-临床检验诊断学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 姜黄素联合 FAPα疫苗对黑色素瘤的影响及其机制探讨 论文作者签名: 指导教师签名: 论 文 评 阅 人 1 ： 胡四海 评阅人 2： 伍尤华 评阅人 3： 答辩委员会主席： 杜军 委员 1： 蔡绍晖 委员 2： 曹仁贤 委员 3： 曹友德 委员 4： 谭黎明 委员 5： 委员 6： 答辩日期： 2015 年 5 月 22 日 南华大学学位论文原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含 其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学 位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文 中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 作者签名： 年 月 日 南华大学学位论文版权使用授权书 本学位论文是本人在南华大学攻读（博/硕）士学位期间在导师指导下完成 的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得以其它 单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校 有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部 或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或 湖南省有关部门规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀博硕士学位 论文全文数据库》，并按《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定 享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学 位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论 文，解密后适用该授权。 作者签名： 年 月 日 导师签名： 年 月 日 目 录 摘要Ⅰ AbstractIII 第 1 章 绪论1 第 2 章 材料和方法7 2.1 材料7 2.2 方法12 第3章 实验结果21 第4章 讨论29 第5章 结论33 参考文献35 综述41 附录49 作者攻读学位期间的科研成果51 致谢53 姜黄素联合 FAPα 疫苗对黑色素瘤的影响及其机制探讨 研究生：谢婉莹 导师：张秋桂 主任技师 中文摘要 肿瘤间质构成了肿瘤细胞生长、浸润转移所必需的微环境，其已成为肿瘤 治疗的重要靶点。抑制肿瘤间质特异性高表达分子－成纤维细胞激活蛋白 α （Fibroblast activation protein α, FAPα）的表达，能够促进抗肿瘤因子 IFN-γ 与 TNF-α 的释放而杀死肿瘤细胞。然而包括以 FAPα 为靶标在内的免疫治疗策略产 生的免疫效应分子 IFN-γ 与 TNF-α 可分别通过诱导吲哚胺双加氧酶（Indoleamine 2, 3-dioxygenase, IDO）的高表达和肿瘤上皮细胞间质变（Epithelial-mesenchymal transitions, EMT）而诱发肿瘤免疫耐受和肿瘤转移。我们研究发现姜黄素能双重 抑制 IFN-γ 诱导的 IDO 表达和 TNF-α 诱导的黑色素瘤 EMT, 据此，本课题首先 对姜黄素的上述功能进行进一步的研究，以期为黑色素瘤的防治提供有效的作用 靶点。然后采用姜黄素联合 FAPα 疫苗的策略，探讨其通过免疫激活和免疫效应 阶段双层面抑制肿瘤生长，并消除 IFN-γ、TNF-α 诱导的肿瘤免疫耐受和肿瘤细 胞转移的效果，为黑色素瘤的防治提供一条有效的新途径。 综上所述，本研究的主要目的： 首先体外探讨姜黄素对 IFN-γ 诱导的 IDO 表达和 TNF-α 诱导的肿瘤 EMT 的 影响，然后体内动物实验研究姜黄素联合 FAPα 疫苗抗黑色素瘤的作用及其机制， 以期为黑色素瘤的防治提供有效的作用靶点和防治策略。 本研究所采用的研究方法： 本研究所采用的研究方法包括：细胞培养、酶联免疫吸附、免疫印迹、免疫 组化、蛋白原核表达与纯化等多种分子生物与免疫学方法和动物实验。 本研究的主要内容： 1）IPTG 诱导包含 FAPα 核心序列片段的原核表达载体 pET28a- FAPαc，表 达大量的 FAPα 核心多肽并加以纯化，纯化的 FAPα 核心多肽作为肿瘤疫苗用于 后续动物免疫。 I 2）体外研究姜黄素对 IFN-γ 诱导的黑素瘤 IDO 表达及 TNF-α 诱导的 EMT 的 影响。 3）动物体内实验评价姜黄素联合 FAPα 疫苗抗黑色瘤的疗效及相关机制探 讨。 本研究的研究结果： 1）FAPα 核心多肽在 BL21 工程菌中的表达是以包涵体的形式存在，且经过 洗涤、纯化、复性等工艺后获得了大量高纯度的 FAPα 核心多肽，其纯度99%。 2）免疫蛋白印迹结果表明姜黄素能够明显降低 IFN-γ 诱导的黑色素瘤 IDO 表达，此外，