金属离子对南极磷虾精氨酸激酶作用研究-生物工程专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 RESEARCH ON EUPHAUSIA SUPERBA ARGININE KINASE BY METAL IONS M.D. Candidate： Jin Qing-xin Supervisor（I）：Park Yong-Doo Supervisor（II）：Wang Yu-long Speciality：Biological Engineering Zhejiang Wanli University Ningbo,P.R.China May, 2014 中图分类号： 单位代码： 10876 学号： 2012881014 密级： 公开 浙江万里学院 硕士专业学位论文 中文论文题目：金属离子对南极磷虾精氨酸激酶作用研究 英文论文题目： Research on euphausia superba arginine kinase by metal ions 申请人姓名： 靳 庆 鑫 校内教师： 朴 龙 斗 校外导师： 王 玉 龙 专业学位类别： 工程专业学位 专业学位领域： 生 物 工 程 所在学院： 生物与环境学院 论文提交日期 2014 年 3 月 31 日 浙江万里学院研究生学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得 浙江万里学院 或其他教育机构的学 位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在 论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 签字日期： 年 月 日 浙江万里学院学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解浙江万里学院有关保留、使用学位论文 的规定，同意浙江万里学院保留并向国家有关部门或机构送交论文的 复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江万里学院可 以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采 用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 （保密的学位论文在解密后适用本授权书） 保密□ 在 年解密后适用本授权书。 本学位论文属于 不保密□。 （请在以上方框内打“√”） 学位论文作者签名： 指导教师签名： 浙江万里学院硕士专业学位研究生学位论文摘要 浙江万里学院硕士专业学位研究生学位论文 摘要 金属离子对南极磷虾精氨酸激酶作用研究 摘 要 南极磷虾（Euphausia superba）是目前发现的世界上蕴藏量最大的动物蛋白 库，且虾肉营养丰富，蛋白含量高，医用价值大，具有巨大的商业开发价值。但 其体积小，虾壳和头部含氟，捕捞后存活期短，因此要求捕捞、去壳、冷冻的设 备和技术难度极高，束缚了其开发利用。 精氨酸激酶是无脊椎动物包括节肢动物甲壳类体内参与能量代谢的重要酶 类，其活性与功能的调节机制对南极磷虾（Euphausia superba）适应低温海域环 境和拥有高能量代谢率、高生长速率的生长模式具有潜在的影响。本论文研究了 几种金属离子（包括重金属）对其结构和功能的影响机制；同时探讨了渗透剂缓 解金属离子作用的机制，以期对南极磷虾肌肉中的精氨酸激酶进行结构和功能的 系统性研究，为南极磷虾在极端低温环境的能量供应和运动机制提供研究基础， 以期有助于南极磷虾的捕捞、保存和开发。 本文测定了 Pb2+、Cu2+、Mn2+、Sr2+、Al3+、Fe3+、Co2+、Fe2+、Mg2+、Zn2+、 Cr3+等几种常见的金属离子对南极磷虾精氨酸激酶（ESAK）活力的影响，发现 多数金属离子对 ESAK 都有不同程度的抑制作用，且随着离子浓度的增加抑制 程度加重；而微量 Mg2+、Mn2+对 ESAK 有促进作用，可能与 ESAK 的催化和调 控有关。 采用酶活力测定、动力学分析、内源荧光、ANS 荧光、CD 光谱和聚沉等分 析手段深入研究了抑制效果好并有代表性的 Pb2+和 Zn2+对 ESAK 结构和功能的 改变。结果表明 Pb2+对 ESAK 属于不可逆抑制，其抑制作用不能通过简单的物 理渗透和加入常见螯合剂来解除；Pb2+变性后的 ESAK 内源荧光发生明显的红 移，并且伴随淬灭；三级结构中没有疏水面暴露，但内部极性增强，非极性减弱； 聚沉分析发现随着 Pb2+浓度的增大，聚沉速度加快，可观测到的聚沉量增大且聚 合物不溶于乙醇等有机溶剂。 Zn2+对 ESAK 的研究表明，随着 Zn2+浓度的升高，酶失活程度加大，失活速 率加快；Zn2+对 ESAK 属于非竞争性抑制，测得的抑制动力学参数 IC50=0.027 mM，Ki,arginine=0.0279 mM，Ki,ATP=0.0208 mM，比较发现 Zn2+对 ATP 抑制作用较 I