超临界流体萃取高效液相色谱离线联用-生物分子高效分离与表征.PDF

维普资讯 第 34卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究报告 第4期 2006年 4月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 447一a,50 超临界流体萃取．高效液相色谱离线联用 分析灵芝中三萜类化合物 张 洁 段继诚 梁 振 张维冰 张丽华 霍玉书 张玉奎 (中国科学院大连化学物理研究所，国家色谱研究分析中心，大连 116023) 。(HealthScienceCenteratSanAntonio，TheUniversityofTexas，SanAntonioUSA78229-3900) 摘 要 在系统考察压力、温度和时间对萃取率影响的基础上，利用超临界流体萃取技术提取了灵芝子实体 中的i萜类化合物。其最佳萃取条件为：压力15MPa，温度35~C，动态萃取时间120rain，CO流量1mL／min， 背压阀温度5013。此外，还建立了高效液相色谱梯度洗脱分离三萜类化合物的方法。通过 比较超临界流体 提取物和甲醇提取物的色谱图，发现两者具有相似的峰形 ，说明超临界流体能够达到与甲醇相近的萃取效果 ， 可以取代甲醇作为新一代的绿色萃取溶剂。 关键词 灵芝，三萜类化合物，超临界流体萃取，高效液相色谱 引 言 灵芝(ganodermalucidum)在我国已有悠久的药用历史，始载于 《神农本草经》。近年来的研究表 明，灵芝可以治疗慢性气管炎、慢性肝炎、冠心病、神经衰弱、白细胞减少症及肿瘤等 。灵芝子实体 (伞状菌体)富含的三萜类化合物已经被证明是其主要的有效药用成分。目前，这类化合物的传统提取 方法是用甲醇、乙醇和氯仿等有机溶剂浸提-4]，不仅所需时间长，而且还会有溶剂残留，效果不理想。 超临界萃取(SFE)是一种绿色的提取技术，不用或者少用有机溶剂，不仅能保持中药本身的药理活性， 而且具有速度快、效率高、能耗较少、成本低、安全性好等优点 卜引。本研究采用超临界CO 从灵芝子 实体中萃取了三萜类化合物，并详细讨论了压力、温度和时间对其萃取率的影响。此外还利用高效液相 色谱实现了大部分组分的基线分离，并对超临界提取物和甲醇提取物的色谱图进行了比较研究，表明超 临界CO 能够达到与甲醇相近的萃取效果。 2 实验部分 2．1 仪器与试剂 JascoTMLC一1500超临界流体萃取仪(日本Jasco公司)。实验用CO 为SFC级 (99．995％)，购 自大 连光明化工研究设计院；P230型高效液相色谱仪(大连依利特公司)，配有 DG-230-4型脱气机 (大连依 利特公司)和JascoUV一2075plus型紫外检测器(日本Jasco公司)。灵芝子实体(沈阳万象生物养殖公 司)经霍玉书教授(德克萨斯大学)鉴定。甲醇为色谱纯(山东禹王实业有限公司禹城化工厂)，乙腈为 超色谱纯(西班牙ScharlauChemieS．A公司)，甲酸为分析纯 (哈尔滨化工化学试剂厂)。 2．2 实验部分 2．2．1 样品的提取 将子实体洗净、干燥、粉碎、过筛，作为待i贝4样品。(1)甲醇萃取法 准确称取灵 芝子实体粉末3g置于5mL甲醇中，60C下浸泡提取 10h，用0．45Ixm滤膜过滤后吹干溶剂，萃取率为 1．22％，重新将萃取物用甲醇定容至500IxL；(2)超临界C0 萃取 准确称取3g灵芝子实体粉末置于 萃取池中，在不同的压力(8～25MPa)和温度(25～45℃)下进行萃取收集。c0流速均为1mL／min，背 压调节器出口温度均为50％。将优化条件(15MPa，35℃)下萃取得到的粉末溶解于500IxL甲醇中， 并用0．45 m滤膜过滤，作为对比样品。 2．2．2 高效液相色谱分离 HypersilC8(250mm×4．6mmi．d．，5 m)色谱柱，室温。流动相A：去 2005-01-26收稿；2005一l1—14接受 本文系中国科学院知识创新工程重要方向性(No．KGCX1-sw_213)基金资助 维普资讯