金属硫蛋白的表面增强拉曼光谱研究-分析化学专业论文.docxVIP

硕士学位论文 硕士学位论文 摘要 摘要 金属硫蛋白(MT)是一类低分子量、高半胱氨酸含量、能结合 大量金属离子的蛋白质。近年来，MT在医学上的应用受到越来越多 的重视。人们认识到MT可能与多种疾病密切相关，特别是 Alzheimer’s疾病等一些神经退化性疾病。因此，研究金属硫蛋白与 不同金属结合的机理及其构型上的变化，对于研究某些疾病的病理和 治疗方法有着重大的意义。 表面增强拉曼光谱(SERS)具有极高的检测表面物种的灵敏度， 能从分子水平上获得物质详细的结构和化学组成信息。应用SERS技 术，可望从分子水平上探究MT复杂的生理活性。但是，MT分子拉 曼散射截面小，易受激光影响碳化分解，杂质影响严重。因此，选择 合适的SERS基底和实验条件，得到重现性好、可信的SERS谱，进 而从分子水平上研究MT生理特性引起空间结构的变化是一个极具 挑战的课题。 本论文的工作和获得成果主要有： 1．探索了几种获取MT分子的SERS谱的方法。实验表明，自组 装Au纳米粒子尽管可以制备出SERS活性高、重现性好的SERS基 底，但是杂质会严重干扰MT的信号。粗糙金电极表面干净，可获得 可信和有意义的SERS谱图。通过EDC／NHS交联反应将MT固定在 修饰了MUA的粗糙金表面的方法，使MUA的信号得到了最大增强， 但却得不到明显的MT的信号，不适合应用于MT的SERS研究。 2．研究了直接吸附在粗糙金表面的金属硫蛋白的SERS谱。结果 表明，MT通过氨基与金作用；apo．MT与金的作用位点受制备方法 影响：在溶液中预制的apo．MT通过半胱氨酸残基的巯基与金结合， 在金表面制备的apo．MT通过氨基和巯基与金结合。从Cd7．MT(II)， Cul2-MT(II)，Cu20．MT(II)至0 ri97．MT(II)，随着金属一S键的逐渐增强， SERS基底上Au—S键的成分逐渐减少，基底对蛋白质二级结构的破 坏减弱。 关键词： 表面增强拉曼光谱，粗糙金表面，金属硫蛋白 硕士学位论文 硕士学位论文 Abstract ABSTRACT Metallothionein(MT)is a type of metalloproteins characterized by a large number of cysteine residues．10W molecular weight and a remarkable ability to coordinate a large number of transition metalions in the form of metal．thiolate clusters．In recent yeas．metallothionein draws more attention in medical application．It is recognized that MT may be closely related to many diseases，particularly Alzheimers disease and other neurodegenerative diseases．Therefore，the studies of different metal．binding mechanisms and the structural changes of metallothionein are of great significances to the pathology of certain diseases． SERS iS an ultrasensitive analytical method to probe the surface species and Can provide detailed information of the structure and chemical composition of the species on the molecular level．It is well．known that enhancement effect of SERS is closely connected with the suitable nanoscale roughness of the substrates or nanoparticles．And SERS can be used to understand the complicated physiologic