金属硫蛋白对心肌缺血再灌注损伤心功能、细胞凋亡影响的实验研究-心胸外科专业论文.docxVIP

华中科技大学同济医学院 华中科技大学同济医学院 2004届硕上学位论文 缩略词表 MT metaliothionein I，R‘’‘’。‘ischemia／reperfusion LDH’’‘‘。‘laetatede hydrogenase CK‘’’‘‘。creatine phosphokinase MDA‘‘。‘。。malonaldehyole ATP。。’’’‘adenosine triphoaphate l(_H Krebs-Henseleit Bcl。‘‘‘‘‘B-cell lymphoma／leukemia Caspase。‘’‘。‘cysteme aspirate-specific proteninase TUNEL‘‘。。。‘terminal deoxynucleotidl transferase-mediated nick end-labeling PCD。。‘。’‘programmed cell death AI apoptosis index 华中科技大学同济医学院 华中科技大学同济医学院 2004届硕L学位论文 金属硫蛋白对心肌缺血再灌注损伤心功能、细胞凋亡影响 的实验研究 华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科 硕士研究生 王向辉 导 师 肖诗亮教授 摘 要 研究背景：心肌缺血再灌注损伤是心血管临床中一种常见的病理生理 过程。在体外循环心脏外科手术、心脏移植、心肌梗塞、冠心病等过程 中都必然经历缺血后再灌注，加重心肌损伤，影响手术后病情恢复及疾 病治疗效果。缺血再灌注损伤的发病机制十分复杂，到目前为止仍未完 全阐明。根据大量临床与实验研究，认为主要与氧自由基损伤及细胞内 钙超载引起的细胞不可逆损伤有关。近年来研究发现细胞掏亡作为一种 特殊的细胞不可逆损伤形式参于心肌缺血再灌注损伤的发生并发挥重 要作用。金属硫蛋白(metallo协ionein，MT)是一种低分子量富含半胱 氨酸的内源性小分子蛋白质，广泛存在于生物体内，可由金属、炎症、 激素、氧化应激或其他理化应激诱导产生，具有贮存转运重金属离子、 清除氧自由基、抑制细胞内钙超载等生物学效应，并可在线粒体、溶酶 体、脱氧核糖核酸水平上起一定的细胞保护作用。研究表明金属硫蛋白 是体内最强的氧自由基清除剂，在心肌缺血再灌注损伤过程中起到明显 保护效应，但其保护机制复杂，目前尚未完全阐明，还存在一定的争议。 本实验通过Zn2+诱导大鼠MT产生及给予人工诱导合成的兔MT，观察 MT对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤后心肌功能、细胞凋亡及Bcl·2、 2 华中科技大学同济医学院 华中科技大学同济医学院 2004届硕{‘学位论艾 Bax、C唧ase一3蛋白表达的影响，初步探讨MT在缺血再灌注损伤中心 且儿保护效应的可能机制。 第一部分 金属硫蛋白对缺血再灌注损伤心肌功能影响的 实验研究 目的：通过腹腔注射金属硫蛋白(metallothionein，MT)及腹腔注射 Zn2+诱导产生MT，观察缺血再灌注损伤大鼠心肌功能及心肌组织酶学 的变化，初步探讨MT对大鼠缺血再灌注损伤(ischemia／reperfusion injury，IRI)心肌功能的影响及保护效应。方法：采用Langendorff离体 心脏灌流模型，SD大鼠32只分为对照组、I／R组、MT组、ZnS04组共 4组，对照组持续灌流；后3组缺血30min，复灌2h。分别检测心肌组 织乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(cK)及丙二醛(MDA)漏出量， 心肌组织三磷酸腺苷(ArP)含量及心功能指标(HR、LVEDP、LVSP 与±dp／dtm。)，用109Cd．血红素饱和法测量心肌组织中金属硫蛋白 (MT)的含量。结果：与I／R组比较，MT组、ZnS04预处理组金属硫 蛋白(MT)表达量增高(p0．01)，心肌细胞LDH、CK与MDA漏出 量降低，而心肌组织ATP含量增高，心功能各项指标改善(p0．01)：MT 组、ZnS04预处理组与对照组比较，两组问的LDH、CK、MDA、ATP、 心功能各项指标差异无显著性。且上述指标ZnS04组较MT组改变更为 明显，但2组问差异无显著性。 结论：腹腔注射给予MT及zn2+诱导 内源性MT产生均可减轻心肌缺血再灌注损伤，改善心肌功能，起到明 显的心肌保护作用。与腹腔注射给予MT相比，Zn2+诱导内源性MT产 ，圭能够更好的减轻心肌细胞膜的损伤，改善心肌代谢，提示此途径可能 华中科技大学同济医学院 华中科技大学同济医学院 2004届硕上学位论文 具有相对更好的保护效应。 关键词 金属硫蛋白 缺血再灌注 心肌保护 第二部分 金属硫蛋白对缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Caspase-3 表达的影响 目的：利用离体心脏灌流模型，观察金属硫蛋白(mcta