金属硫蛋白拮抗细菌脂多糖急性肝损伤的机制研究-营养与食品卫生学专业论文.docxVIP

金属硫蛋自拮抗细菌脂多糖急性肝损伤的机制研究金属硫蛋白拮抗细菌脂多糖急性肝损伤的机制研究 金属硫蛋自拮抗细菌脂多糖急性肝损伤的机制研究 金属硫蛋白拮抗细菌脂多糖急性肝损伤的机制研究 中文摘要 细菌脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)是一类由革兰氏阴性杆菌产 生的内毒素。在感染等情况下，大量LPS进入机体可引发全身多器官炎 症反应。低剂量的LPS同样也可以导致机体的损伤。由于肝脏是清除内 毒素的主要场所，肝脏成为内毒素引起的全身炎症反应中最易受损的器官 之一。因此，研究LPS引起的炎症反应与肝脏损伤的关系具有十分重要 的现实意义。 金属硫蛋白(Metallotllionein，M丌)是一类广泛存在于生物体内富 含半胱氨酸、低分子量的、可被金属诱导产生的金属结合蛋白。MT在重 金属解毒，维护机体内稳态，增强机体适应能力等方面发挥着重要的生物 学作用，是一种可以抵抗外源性损伤的细胞防御性蛋白。TomoH等发现 MT基因敲除小鼠对LPS引起的炎症反应较与之对应的野生型小鼠更为敏 感，提示MT在LPS引起的炎症损伤中发挥一定的保护作用，但其具体 机制目前尚不清楚。 本研究通过观察MT(Mr．I、Mr-II)基因敲除(MT-／-)小鼠、与相 对应的野生型(Mr+件)小鼠以及以硫酸锌(ZnS04)诱导形成的Mr高 表达小鼠三种动物模型对LPS引起的急性肝脏损伤程度的比较。进而以 肝脏KC细胞特异性抑制剂氯化钝(Gadolinium Chloride，GdCb)抑制 KC活性，应用NF-KB特异性抑制剂四氢化吡咯二硫代氨基甲酸脂 (Pyrollidine Dithiocarbamate，PDTC)抑制NF．r,B的转录活性，探讨KC 细胞、NF．KB信号通路在LPS致肝脏急性炎症过程中的作用及MT的调 控作用。初步探讨金属硫蛋白在LPS引发急性肝脏损伤中的作用及其可 2 金属硫蛋白拮抗细菌脂多糖急性肝损伤的机制研究能机制。 金属硫蛋白拮抗细菌脂多糖急性肝损伤的机制研究 能机制。 本课题包括以下两个部分： 第一部分：MT对LPS致急性肝脏炎性损伤的影响 使用MT基因敲I涂(MT-／-)d鼠、野生型(Mn_／十)小鼠为动物模型，采 用镉饱和法测定MT含量，确证动物模型可靠性。腹腔注射不同剂量LPS (1mg／kg、5mg／kg、10mg／kg、20mg／kg)24+o,-j-后处死动物，以]0mg／kg 剂量腹腔注射LPS分别在3h、6h、1211、24h、48h后处死动物，每组6 只动物。通过组织病理学、血液生化分析比较观察不同MT表达水平动物 模型对LPS致急性肝脏炎症损伤的敏感性差异。采用ELISA法测定细胞 因子含量，GRIESS法检测NO含量，观察不同MT表达水平动物模型中 上述具有细胞毒性效应炎性介质表达的差异。通过脂质过氧化产物、蛋白 质过氧化产物的测定，从自由基损伤角度初步观察MT对LPS致肝脏炎 症损伤保护效应的可能机制。 结果表明，LPS可以使两种小鼠ALT、AST等血清酶活性均呈时间、 剂量依赖性升高。组织病理学检查显示，肝脏出现肝细胞浊肿，空泡变性、 灶性液化坏死、星状细胞增生。细胞因子TNF．a、IL-113、IL-6表达上调， 血清以及肝脏组织内NO含量增加。肝脏内脂质过氧化产物增加。m+升 小鼠血清Au’，AST等升高趋势较M■，-小鼠更为显著。炎症反应早期 MI斗小鼠肝组织内炎性细胞浸润程度轻于Mn-／+小鼠，随炎症反应时间 延长，MT-扣小鼠较MT+辟小鼠肝组织损伤程度呈加重趋势。LPS作用下， MT．／-小鼠较Mn|／+小鼠细胞因子、NO等细胞毒性炎性介质表达上调趋 势更为显著。LPS致MT-／．小鼠肝脏脂质过氧化程度较MT十，+小鼠更为严 重。结论MT对LPS引起的肝脏损伤具有保护作用，其可能机制与MT 对LPS以及对LPS致炎过程中生成的ROS的清除作用以及MT表达水平 导致机体对外源性LPS刺激清除作用不同有关。 金属硫蛋白拮抗细菌脂多糖急性肝损伤的机制研究以Zn(ZnS04 金属硫蛋白拮抗细菌脂多糖急性肝损伤的机制研究 以Zn(ZnS04 300ktmol／kg S．e．连续给药两天)作为诱导剂形成MT 的高表达小鼠为动物模型，通过镉饱和法测定肝组织内MT含量，通过血 液生化活性分析。肝脏组织病理学检查、细胞因子、NO测定、脂质过氧 化产物检测，比较观察MT表达增高是否有利于机体抵抗LPS致急性肝 脏炎性损伤。结果表明，zn可以显著增加野生型小鼠肝组织内MT含量， 对敲除型小鼠肝组织内MT含量无影响。Zn预处理可以显著降低野生型 小鼠血清酶升高趋势，可以有效减轻野生型小鼠肝组织病理损伤程度，减 少细胞因子、NO等细胞毒性炎性介质的生成，减轻肝组织脂质过氧化损 伤程度。zn预处理对MT敲