结合珠蛋白基因多态性与中国人冠心病的关联研究-内科学(心血管病)专业论文.docxVIP

浙江大学硕士学位论文细胞中表达内源性CDl63发现，CDl63清除Hpl一卜Hb的能力要显著强于 浙江大学硕士学位论文 细胞中表达内源性CDl63发现，CDl63清除Hpl一卜Hb的能力要显著强于 Hp2-2一lib，而清除Hp2一卜llb的能力居中。此外，结合珠蛋白作为一种急性期 蛋白，在参与宿主抗感染、损伤组织的修复以及内环境稳定的过程中起着重要 作用，其血清含量在感染、创伤、炎症、肿瘤、心肌梗死等病理状态时显著升 高。除以上的功能外，Hp尚有抑制前列腺素合成、抑制细菌、促进血管生成 及重要的免疫作用，Hp以上抗氧化、抗炎、对损伤组织的修复及促进血管生 成等生理功能均与抑制冠心病的发生发展密切相关。由于Hp具有遗传多态现 象，而且不同的基因型具有不同的结构及生理功能，近年来，研究Hp基因多态 性与冠心病的发生发展已成为一个新的重要课题。 有研究表明lip2—2基因型与冠心病的发生密切相关，尤其是在阻塞性睡 眠呼吸暂停综合征和糖尿病患者等高危人群中，同样也研究发现Hp2—2基因 型是冠心病转归与预后的不利因素。基于Hp基因可通过影响机体内氧化及炎 症反应，可能参与了动脉粥样硬化的进程，而且不同的种族和地域Hp基因多 态性可能存在一定的差异，目前国内尚无有关Hp基因多态性与冠心病相关性 研究的报道，因此对中国汉族人中该基因多态性和冠心病的相关性的探讨是 可行和值得的。 目的 本研究通过检测浙江地区中国汉族人Hp基因多态性频率，以探讨Hp 基因多态性与冠心病发生发展的关系。 对象与方法 一、 研究对象 冠心病组：冠心病患者189例，均选自2005年3月至2005年12月浙江 大学医学院附属第二医院心内科病房住院病人，符合世界卫生组织(WHO)关 于缺血性心脏病的命名及诊断标准，所有患者经冠状动脉造影证实。其中男 性149例，女性40例，平均年龄63．14±10．38岁。 对照组：对照组242例，均选自同期浙江大学医学院附属第二医院心内 科病房住院病人，所有入选者经冠状动脉造影检测完全正常。其中男性175 例，女性67例，平均年龄61．56±10．44岁。 本研究人群个体之间无血缘关系。 2 浙江大学硕士学位论文二、冠心病的诊断 浙江大学硕士学位论文 二、冠心病的诊断 冠状动脉造影时，分别对右冠状动脉、左冠状动脉前降支、左旋支和左 ，主干狭窄病变程度进行评价。各主要分支存在50％狭窄定义为有意义病变， 诊断为冠心病。 三、冠心病危险因子调查 设计冠状动脉粥样硬化登记调查表，详细记录每一患者的临床表现，辅 助检查，化验检查结果，危险因素及冠心病家族史。 冠心病经典危险因子按下述标准定义： 1．高脂血症采用2006年血脂异常防治指南，为血清总胆固醇(TC)i200mg／dl 或／和甘油三酯(TG)≥150rag／all或／和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c) ≥120mg／dl和／或高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)≤40mg／dl。 2．高血压采用1999年世界卫生组织和国际高血压学会(删O／IsH)的标准定 义和诊断。 3．糖尿病符合1997年美国糖尿病学会(ADA)糖尿病诊断标准。 4．吸烟指目前吸烟和既往吸烟已经戒烟者。 四、基因组DNA抽提和Hp基因多态性检测 1．白细胞基因组DNA抽提：以酚／氯仿法提取外周血白细胞DNA。 2．Hp基因多态性检测：参考Werner Koch的PCR实验方法，分别用引物 Pl和P2扩增Hpl特异片段，引物P3和P4扩增Hp2特异片段。 上游引物P1：5’书cTGTCACTGcTGcGTA从G一3 下游引物P2：5’-GGTCAGTCTTTGGTTGGGTAG-3’扩增Hpl特异性片段。 PCR反应体系： 模板DNA(100ng／tq) 1蛆 10×Reaction buffer(Without MgCl2) 2蛆 25姗MgCl2 2肛1 10唧dNTP 0．5m 10Phi上下游引物 各0．5111 Takara LA Tag DNA聚合酶(5U／L)0．4弘l DdH20 13．1m 浙江大学硕士学位论文Total 浙江大学硕士学位论文 Total Volume 20“l 上游引物P3：5’-CCTGCCTCGTATT从cTGcAcAT一3 下游引物P4：5’-cCGAGTGcTCcAcATAGccATGT一3’扩增Hp2特异性片段， 反应体系与上相同。 扩增条件：在PCR热循环仪上扩增，95Y：预变性3分钟，95℃变性1分 钟，69℃退火和延伸2分钟(P1和P2扩增时