结核分枝杆菌持留相关基因及其应用研究-微生物学专业论文.docxVIP

独创性声明e 独创性声明 e ’订} _ 本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果，文中已加了 特别标注。对本研究及学位论文撰写曾做出贡献的老师、朋友、同仁 在文中作了明确说明并表示衷心感谢。 学位论文作者．谬磊 签字日期．删年j，月娟 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规 定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允 许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院(筹)可以将学位 论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩 印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 奄 矿- q (保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：口不保密， 口保密期限至 年 月止) 学位论文作者签名：孝磊 签字日期：加，，年，月力f日∥ 电 .- a ， ， 目 目 录 j{25要 ．．I Abstract ．．V 缩略词表 ．．1 ￡ 第1章文献综述 3 ，l 1结核病现状 。3 q 1．1全球结核病现状 。3 1．2国内流行现状 4 2持留现象与持留菌 。4 3脂肪酸代谢与结核分枝杆菌持留 ．．5 3．1 GntR家族 5 3。2结核分枝杆菌与巨噬细胞免疫 。6 3．3分枝菌酸及其分类 。7 3．4分枝菌酸的合成及其调节 ．．7 4乙醛酸循环旁路与结核分枝杆菌持留 lO 4．1乙醛酸循环旁路 10 4．2异柠檬酸裂解酶在乙醛酸循环中的作用 ．1l 4．3异柠檬酸裂解酶的基因结构 。1l 4．4异柠檬酸裂解酶基因的表达调控 12 5 tBRNA与细菌的持留 ．13 5．1 tmRNA的发现 ．13 5．2 tmRNA的结构 ．14 5．3 tmRNA的作用机制 ．1 5 6 I CL、FadR与新药研发 ．1 6 6．1 l CL与新药研发 ．．1 6 6．2 FadR与新药研发 l 6 6．3高通量药物筛选模型 17 参考文献 19 第2章绪论 。29 1选题依据、研究目的与意义 29 2科学问题 ．29 3研究内容与技术路线 30 参考文献 ．3 1 第3章结核分枝杆菌脂肪酸代谢调节因子(Fatty ac i d metabo Ii sm regu I ator：FadR)的预 测与功能研究 ．33 1引言 ．33 1．1大肠杆菌中FadR蛋白的作用及其结构 。33 1．2结核分枝杆菌中FadR潜在的功能 ．．34 2材料与方法 ．35 2．1实验材料 35 2．2实验方法 ．．． ．38 3实验结果 ．43 3．1分枝杆菌GntR家族蛋白 3．1分枝杆菌GntR家族蛋白 44 3．2利用PCR方法获得Rv0494编码序列 47 3．3重组质粒的构建及鉴定 。47 3．4重组质粒序列测定结果(由上海英骏生物技术有限公司完成) ．49 3．5重组质粒对宿主菌的影响 49 3．6重组蛋白的表达及其表达形式鉴定 ．49 ’ 3．7重组蛋白的纯化 50 3．8脂肪酸分析 ．5 1 ， 4讨论 ．52 参考文献 54 第4章结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶(I$0Citrate lyase． ICL；EC 4．1．3．1)高通量筛选模 型的构建及活性化合物的筛选 ．59 1弓I言 ．59 1．1结核病现状 59 1．2结核分枝杆菌致病机理及异柠檬酸裂解酶在其中所发挥的作用 ．59 1．3高通量药物筛选 ．60 1．4 B一氨基酮类化合物应用现状 6l 2材料与方法 ．6 l 2，1实验材料 6l 2．2实验方法 ．63 3实验结果 66 3．1．用巢式PCR方法获得I CL编码序列 66 3．2．重组质粒的构建及鉴定 68 3．3重组质粒序列测定结果(由上海英骏生物技术有限公司完成) ．69 3．4重组质粒对宿主菌的影响 ．．69 3．5重组蛋白的表达及其表达形式鉴定 ．70 3．6重组蛋白纯化 71 3．7酶活力检测及其优化 ．73 3．8筛选模型的评估 74 3．9阴S0对l CL活性的影响 74 3．10重组ICL化合物抑制剂高通量筛选 75 4讨论 ．76 参考文献 78 第5章SsrA(tmRNA)在细菌持留性中的作用研究 81 1弓I言 ．8 1 2材料与方法 8l 2．1实验材料 8l 2．2实验方法 84 3实验结果 93 3．1 SsrA缺失菌株的构建 。93 3．2 SsrA基因编码序列的扩增 。93 3．3重组质粒的构建 94 3．4菌株持留性检测结果 95 4讨论 ．96 参考文献 参考文献 ．98 第6章总结 99 9}f录 ． ．101 j目t谢 ．．109 发表论文及参加课题一览表 1 1 1 f { ～