金雀异黄素对雄性斑马鱼VTG的诱导及其机理研究-生态学专业论文.docxVIP

＼燃Y删,t ＼燃Y删,t830353 金雀异黄素对雄性斑马鱼VTG的诱导及其机理研究 学位论文完成日期： 指导教师签字： 答辩委员会成员签字： ，.， .-.. 独创 独创 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得【洼；塑旦遗直墓他霞噩挂别 直明的：奎拦互窒)或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作 的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：诗．i舌 签字日期：矽f9年占月7日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人 授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息 研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公 众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：落邑 导师签字： 调蕊 签字嗍渺纠月7日 签字日期：wj。年多月7日 J J 金雀异黄素对雄性斑马鱼VT9的诱导及其机理研究摘 金雀异黄素对雄性斑马鱼VT9的诱导及其机理研究 摘 要 金雀异黄素(Genistein，4’，5，7．三羟基异黄酮)是一种广泛存在于豆类植物中的 异黄酮类植物雌激素，化学结构类似于17,8-雌二醇(E2)，是一种潜在的环境雌激 素。目前金雀异黄素以较高浓度广泛地存在于鱼类饵料和环境水体中，使鱼类面 临着食物和水体双重暴露的威胁。弄清金雀异黄素对鱼类的雌激素效应及其作用 机理，对于发展水产养殖、保护渔业资源有着重要的理论和实际意义。 雄鱼及幼鱼的卵黄原蛋白(VTG)作为一种公认的检测环境雌激素效应的生物 标志物，曾被用于金雀异黄素对鱼类的雌激素效应的检测。目前，虽然有研究证 实含金雀异黄素的饵料喂养能诱导雄鱼及幼鱼体内VTG的产生，但对其诱导机 理却尚未进行深入研究。因此，本文验证了金雀异黄素水体暴露对雄性斑马鱼 VTG的诱导效应，并从金雀异黄素影响雌激素受体表达及性激素水平变化的角 度，初步研究了其对VTG的诱导机理。 本实验采用1熠几、10腭几、100地几、1000鹏几浓度的金雀异黄素对成年 雄性斑马鱼进行水体暴露28天，通过real-time PCR技术检测雄鱼肝脏内Vt91 mRNA的表达水平，验证水体中的金雀异黄素对鱼类VTG诱导的雌激素效应； 在此基础上，通过检测雄性斑马鱼肝脏内ERa mRNA、ER／／mRNA的表达水平， 进一步研究了金雀异黄素在体内实验中对鱼类VTG诱导的选择性雌激素受体介 导机制；并利用放射性免疫法检测了雄性斑马鱼性腺内睾酮和雌二醇水平的变 化，探讨金雀异黄素是否通过影响性激素水平来实现对VTG的诱导。 本文的研究结果表明： (1)1 pg／L、lO肛g／L、100肛g／L、1000嵋几的金雀异黄素水体暴露成熟雄性 斑马鱼28天后，各处理组Vt91 mRNA的表达水平均上升，10“g／L和100 pg／L 浓度组出现了显著上升，高浓度组(1000 pg／L)和E2对照组出现了极显著上升， 并具有剂量效应关系，证实了金雀异黄素能够诱导鱼类VTG的产生。 (2)与溶剂对照组相比，金雀异黄素处理组ERa mRNA的表达水平极显著降 低，除低浓度组(1耀．几)外其他浓度组ER∥mRNA的表达水平均出现了极显著上 升；E2处理组两种ER基因的表达水平均极显著上升。证实了金雀异黄素对鱼类 VTG基因的转录调节主要是通过El妒来介导的，具有ERfl依赖性，推测这可能 是金雀异黄素与ERp的选择性结合及其结合力的大小所决定的。 是金雀异黄素与ERp的选择性结合及其结合力的大小所决定的。 (3)除l熠几和1 00 pg／L浓度组外其他金雀异黄素处理组鱼体性腺内睾酮含 量极显著下降，各处理组雌二醇含量均极显著上升。结果表明，金雀异黄素诱导 斑马鱼肝脏内VTG产生的作用途径，一条是E即选择性介导途径，另一条则是 通过直接提高雄鱼性腺内雌二醇的水平。 关键词：金雀异黄素，斑马鱼，Vtg mRNA，ER，性激素，real．time PCR 2 The The Research of effects and mechan i sms of gen i ste i n on i nduct i on of VTG i n ma I e Zebraf i sh(Danio rerio) Abst ract Genistein is