课件：补体测定和补体结合实验.ppt

免疫学检验 第七章 补体测定和补体结合实验 经典途径补体总活性的测定 补体旁路活化的溶血活性测定 单个补体成分的测定 补体结合试验 补体的概念 补体是血清中具有酶活性的一种不耐热球蛋白。 由三组球蛋白分子组成： 九种补体成分组成 B因子、D因子、P因子 补体活化过程中的抑制因子和灭活因子 Jules Bordet? (1870-1961), discoverer of complement?? By National Library of Medicine Proteins of the Complement system Table 1. Proteins of the Complement system Classical Pathway Lectin Pathway Alternative Pathway Lytic Pathway Activation Proteins: C1qrs, C2, C3, C4 Control Proteins: C1-INH, C4-BP Mannan binding protein (MBP), mannan-asociated serine protease (MASP, MASP2) C3, Factors B D*, Properdin Factors I* H, DAF, CR1, etc. C5, C6, C7, C8, C9 Protein S Components underlined acquire enzymatic activity when activated. Components marked with an asterisk have enzymatic activity in their native form. 补体经典激活途径 补体激活途径 补体激活和调节系统 经典途径补体总活性的测定 1. 血清补体总活性测定（CH50试验） 50% complement hemolysis 实验原理 补体最主要的活性是溶细胞作用。特异性抗体与红细胞结合后可激活补体经典途径，导致红细胞表面形成跨膜小孔，使胞外水分渗入，引起红细胞肿胀而发生溶血。 当红细胞和溶血素含量一定时，在规定反应时间内，溶血程度与补体活性程度呈正相关。 经典途径补体总活性的测定 补体介导的溶血反应曲线 豚鼠血清1:500 溶血% 经典途径补体总活性的测定 2. 脂质体liposome均相免疫溶破法 用脂质体做固相载体，脂质体内包有荧光素、有色染料或酶等物质。脂质体表面偶联抗原或抗体。 当致敏的脂质体与相应的抗体或抗原特异性结合后，经典途径激活补体，导致脂质体溶破。 释放出的脂质体内容物的量与补体活性呈正相关。 单个补体成分的测定 在30多种补体成分中，主要检测C3、C4、C1q、B因子和C1酯酶抑制物。 测定方法可分为溶血法和免疫化学法。溶血法用以检测单个补体成分的溶血活性，免疫化学法则测定其含量，目前多采用免疫比浊法。 单个补体成分的测定 免疫溶血法 溶血法主要根据抗原与其特异性抗体(IgG、IgM型)结合后可激活补体的经典途径，导致细胞溶解。 该方法中抗原为SRBC，抗体为兔或马抗SRBC的抗体，即溶血素。将两者组合作为指示系统参与反应。试验中有两组补体参与，一组是作为实验反应系统的补体， 另一组为待测血清中的补体。溶血程度与待测补体成分活性有关，仍以50%溶血为终点。 单个补体成分的测定 免疫化学法 免疫化学法分为单向免疫扩散法、火箭免疫电泳、透射比浊法和散射比浊法。 前两种方法多用手工操作，影响因素多，结果重复性差，已逐渐被自动化检测仪器代替，对补体的C3、C4、B因子等单个成分进行测定。 单一补体含量与补体生物学活性 补体结合试验 凡能激活补体的IgM和IgG类抗体与相应抗原结合的反应均可应用本法检测。目前主要用于病毒性传染病诊断和流行病学调查，以及一些自身抗体、肿瘤相关抗原和HLA血清学分型的检测。 补体结合试验 试验原理 反应系统: 已知抗原(或抗体)与待测抗体(或抗原) 补体系统 指示系统: SRBC与相应溶血素 补体结合试验 补体结合试验 如果反应系统于存在待测的相应抗体(或抗原)，则反应的第一阶段抗原抗体复合物结合补体，此时由于补体已被结合掉，反应液中已无游离补体，故第二阶段加人指示系统不出现溶血，补体结合试验阳性。 补体结合试验 如果反应系统中抗原(或抗体)缺乏，或两者不对应，则反应的第一阶段补体游离，与第二阶段加入的指示系统结合出现溶血，补体结合试验阴性。试验中将反应系统的待测抗原(或抗体)作系列倍比稀释可作定量测定。试验中以50%不溶血为判断终点。 补体测定的应用 1.诊