测定苷甲对ERK激酶活性影响的三种方法比较.PDFVIP

( ) 第 5 卷第 1 期 杭州师范学院学报 自然科学版 Vol . 5 No . 1 ( ) 2006 年 1 月 J ournal of Hangzhou Teacher s College Natural Science Edition J an . 2006 文章编号 :1008 - 9403 (2006) 0 1 - 0053 - 05 测定苷甲对 ER K 激酶活性影响的三种方法比较 1 ,2 2 2 刘姬艳 ,于立坚 ,马润娣 ( 1. 杭州师范学院 生命科学学院 ,浙江 杭州 3 10036 ; 2 . 广东海洋大学 广东省海洋药物重点实验室 , 广东 湛江 524025 ) ( ) 摘 　要 : 细胞外信号调节蛋白激酶 ER K 在细胞生长 、分裂 、恶性转化 、凋亡等过程中起重要作用. 土贝母 ( ) 苷甲 下称苷甲 是从传统中药土贝母块茎中分离出来的一种三萜皂苷. 该研究分别用放射 自显影 、液闪和蛋白 免疫印迹法检测苷甲对 ER K 激酶活性的影响. 结果表明 ,苷甲能快速激活 ER K. 三种检测 ER K 激酶活性的方 法各有短长. 关键词 : 土贝母苷甲;细胞外信号调节蛋白激酶 ;放射自显影法 ;液闪法 ;蛋白免疫印迹法 中图分类号 :Q279 　　　　　文献标识码 :A ( ( ) 细胞外信号调节蛋白激酶 ext racellularsignal regulat ed p rot ein kina se , ER K 是 1986 年由 St ur gill ( ) [ 1] 等人首先报告的丝裂原活化蛋白激酶 mito genactivat ed p rot ein kina se , MA P K 家族中重要的一员 . ER K 包括 ER K1 和 ER K2 ( 即p 44MA P K 和 p 42MA P K) ,是细胞内的一类丝氨酸/ 苏氨酸蛋白激酶 ,存在 于真核生物的大多数细胞内. Ra s/ Raf1/ M E K/ ER K 通路是由一个小 GTP 结合蛋白连接活化的受体酪 氨酸激酶和胞浆蛋白激酶级联反应 ,是多种影响基因表达细胞内信息传递的共同通路[2 ] 126127 . ER K 接受 上级的级联反应信号转位进入细胞核后 ,可磷酸化胞浆蛋 白,激活一些核内的转录因子如 cfo s 、cj un 、 EL K1 、cmyc 和 A TF2 等 ,在细胞生长 、分裂 、恶性转化 、凋亡等过程中起重要作用[3～6 ] . 另外 , ER K 还可 磷酸化 ER K 通路的上游蛋白如 SO S 、Raf 、M E K 等 ,进而对该通路负反馈进行调节[2 ]73 1 . 而苷甲是从生药土贝母 [Bolbo st emma p aniculat um (Maxim . ) Franquet ( Cucur bit aceae) ] 块茎中分 离