基础生物化学-生物氧化.ppt

* ppt课件 ②电子传递过程中复合物I、Ⅲ和Ⅳ中的递氢体起质子泵的作用，将H+从线粒体内膜基质侧定向地泵至内膜外侧空间，而将电子(2e)传给其后的电子传递体。 * ppt课件 ②根据在有氧条件下氧化反应达到平衡时各种传递体的还原程度来确定。 Chance和Williams使用分光光度法测定离体的线粒体在有氧条件下TCA反应达到平衡时，呼吸链中各种传递体的还原程度。反应达到平衡时从底物到氧的各种传递体的还原程度是递减的，底物的最高，氧最低。 * ppt课件 好象物理学上的联通管，若进水量等于出水量，即流量达到平衡时，离进水口最近的水管中水位最高，离出水管最近的水管中水位最低，从进水管到出水管水位逐渐减低，若把水流视为电子流，就是此情况。 * ppt课件 ③使用特异的抑制剂 特异的抑制剂能阻断呼吸链中的特定环节，阻断部位的底物一侧的各种传递体应为还原型，阻断部位的氧一侧的各种传递体应为氧化型。 * ppt课件 表中可见FP、Cyt b位于抗霉素A阻断部位之前，Cyt c、cl、aa3位于阻断部位之后。用不同的抑制剂作此实验，就可以确定呼吸链中各种传递体的排列顺序。 使用抗霉素A前后递电子体的还原型百分数 * ppt课件 ④在体外实验中，将线粒体分成各种复合物，检测其各自催化的反应，再将其重组，检测其催化能力。 美国格林(Green)等实验室成功地将呼吸链分离成具有催化活性的四种复合物以及CoQ和Cytc。将Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ这四种复合物1：1：1：1的比例混合，加上CoQ和Cyt c重组，基本上恢复了线粒体原有的催化能力。 * ppt课件 借助上述实验方法，呼吸链各组分的排列顺序已基本明确，但仍有些不一致的看法，其中以CoQ至细胞色素C以及Fe-S和CoQ的定位和数量也有争议。 * ppt课件 6.2.2.3 呼吸链 在脱氢酶催化下底物AH2脱下的氢交给NAD生成NADH，在NADH脱氢酶作用下，NADH将两个氢原子传递给FMN生成FMNH2，再将氢传递至CoQ生成CoQH2，此时2个氢原子解离成2H+ +2e，2H+游离于介质中，2e经Cyt b、c1、c、aa3传递，最后将2e传递给1/2O2，生成O2-，O2-与介质中游离的2H+结合生成水。 * ppt课件 琥珀酸在脱氢生成的FADH2，将氢传递给CoQ，生成CoQH2，此后的传递和NADH氧化呼吸链相同。 * ppt课件 线粒体中物质代谢会生成大量的NADH和FADH2，它们可来自丙酮酸氧化脱羧、TCA、脂肪酸的β-氧化和L-谷氨酸的氧化脱氨等反应。 * ppt课件 * ppt课件 6.2.3 电子传递抑制剂 电子传递抑制剂能够在呼吸链某一特定部位阻断电子传递。 * ppt课件 ①鱼藤酮(rotenone) 鱼藤酮是一种极毒的植物毒素，用作杀虫剂，它抑制复合物Ⅰ，阻断电子由NADH→CoQ的传递，但不影响FADH2→CoQ的氢传递。 安密妥(amytal)、杀粉蝶菌素A(piericidin A)等与鱼藤酮作用位点相同。 * ppt课件 ②抗霉素A(antimycin A) 抗霉素A是从灰色链球菌分离出的一种抗菌素，抑制复合物Ⅲ的电子传递作用。 ③氰化物、叠氮化物、CO和H2S 这些抑制剂均阻断细胞色素aa3至O2的电子传递，其中CN-和N3-与氧化型Cytaa3(Fe3+)有高度亲和力，CO则与还原型Cytaa3(Fe2+)形成复合物。 * ppt课件 6.3 氧化磷酸化 6.3.1 氧化磷酸化的概念及类型 ATP几乎是生物组织细胞能够直接利用的唯一能源，在糖、脂类及蛋白质等物质氧化分解中释放出的能量，相当大的一部分能使ADP磷酸化成为ATP，从而把能量保存在ATP分子内。 生物体内通过生物氧化合成ATP的方式有底物水平磷酸化和氧化磷酸化。 * ppt课件 ①底物水平磷酸化(substrate level phospharylation) 底物分子中的能量直接以高能键形式转移给ADP生成ATP，这个过程称为底物水平磷酸化。 * ppt课件 ②氧化磷酸化(oxidative phosphorylation) 氧化磷酸化是需氧生物合成ATP的主要途径。 氧化是底物脱氢或失电子的过程，磷酸化是ADP与Pi合成ATP的过程。 在结构完整的线粒体中氧化与磷酸化这两个过程是紧密地偶联在一起的，即氧化释放的能量用于ATP合成，这个过程就是氧化磷酸化，氧化是磷酸化的基础，而磷酸化是氧化的结果。 * ppt课件 电子从NADH或FADH2经电子传递链传递到分子氧形成水，同时偶联ADP磷酸化生成ATP，称为电子传递偶联的磷酸化或氧化磷酸化。 * ppt课件 6.3.2 氧化磷酸化与电子传递的偶联 6.3.2.1 P/0值测定 P/O是指每消耗一个氧原子(或每对电