发酵生产γ-聚谷氨酸过程中培养基组分的优化.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，３３（１１）：４４５０ 纳豆芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｎａｔｔｏ）发酵生产 聚谷氨酸 γ 过程中培养基组分的优化 １，２ １，２ １ １ 张　文 　张树清 　马晓彤 　何翠翠 （１中国农业科学院农业资源与农业区划研究所　北京　１０００８１　２农业部植物营养实验室　北京　１０００８１） 摘要　通过摇瓶培养的方法，对纳豆芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｎａｔｔｏ）ＺＷ２发酵生产 聚谷氨酸过程中 γ 的培养基组分进行优化，从而提高 聚谷氨酸的产量。在单因素试验优化的基础上，利用Ｄｅｓｉｇｎ γ Ｅｘｐｏｒｔ软件，采用ＰｌａｃｋｅｔｔＢｕｒｍａｎ试验设计筛选培养基组分中对产 聚谷氨酸影响最显著的因 γ 子，然后通过爬坡实验逼近 聚谷氨酸产量的最大区域，最后运用三因素三水平的ＢｏｘＢｅｈｎｋｅｎ γ Ｄｅｓｉｇｎ实验设计对关键因子进一步优化求得产 聚谷氨酸的最佳条件．结果表明，获得最佳产量 γ 时关键因子的最优组合为：谷氨酸钠（６８．７６ｇ／Ｌ）、氯化铵（１．１６ｇ／Ｌ）和磷酸氢（二钾（２．１６ｇ／Ｌ）， 在此条件下，６组验证试验的平均产量为 ３６．４２１ｇ／Ｌ，是优化前的 １．５４倍。纳豆芽孢杆菌 （Ｂａｃｉｌｌｕｓｎａｔｔｏ）ＺＷ２发酵生产 聚谷氨酸培养基组分的优化过程中，采用ＰｌａｃｋｅｔｔＢｕｒｍａｎ γ Ｄｅｓｉｇｎ和ＢｏｘＢｅｈｎｋｅｎＤｅｓｉｇｎ相结合的方法，效果显著，经济有效。 关键词　 聚谷氨酸　Ｄｅｓｉｇｎｅｘｐｏｒｔ软件　响应面法 γ 中图分类号　Ｑ９３９．９９ 　　 聚谷氨酸（Ｐｏｌｙｇｌｕｔａｍｉｃａｃｉｄ，简称 ＰＧＡ）是 用二次多元回归方程拟合响应值与因素以及因素与因 γ γ γ 一种由微生物（主要为芽孢杆菌类）发酵产生的胞外多 素之间的函数关系，通过对响应曲面和等高线的分析 ［１］ ［７］ 肽 ，是目前发现仅有的可由微生物聚合而得到的四 得到最优的工艺参数 。该方法能在有限的实验次数 种聚合氨基酸（聚天冬氨酸、聚谷氨酸、聚鸟氨酸、 γ ε 下评价各因子对生物过程的影响，探清各因子交互作 聚赖氨酸）之一。 聚谷氨酸最早于１９３３年在炭疽芽 γ 用的程度，最后求得其最优条件，从而弥补以前微生物 ［２］ 孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓａｎｔｈｒａｃｉｓ） 外荚膜中发现，１９４２年 培养基优化过程中单因素实验与正交试验设计等方法 ［３］ 的不足［８］。为此，笔者以本实验室自筛菌种———纳豆 Ｂｏｖａｒｎｉｃｋ等 首次发现枯草芽孢杆菌能够产生 聚谷 γ 氨酸，此后，尤其是进入２１世纪之后，微生物发酵法生 芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｎａｔｔｏ）ＺＷ２为发酵菌种，在单因素 产 聚谷氨酸的研究受到了越来越多研究者的关注。 实验优化的基础上运用响应面优化法对产 聚谷氨酸 γ