浅议高效液相色谱法测定蒙药黄花铁线莲中槲皮素含量.docxVIP

浅议高效液相色谱法测定蒙药黄花铁线莲 中桝皮素含量 中图分类号：R9文献标识码：A文章编号：1007-0745 （2013） 01-0082-01 摘要：目的测定黄花铁线莲中桝皮素的含量，为蒙药黄 花铁线莲中桝皮素的含量提供检测方法，制定质控标准。方 法采用高效液相色谱法,Kromas订（250 mmX4. 6 mm, 5 P m） 色谱柱，甲醇0.4%磷酸（60： 40）为流动相，流速为1.0 ml/min；检测波长360 nmo结果梅皮素浓度在15. 35? 76. 75 ng/ml范围之间与峰面积线性关系良好，r=0. 999 6O 榔皮素平均回收率为98. 13%, RSD=1. 55%o结论采用高效液 相色谱法测定黄花铁线莲中桝皮素的含量具有分离效果好、 简便、准确等优点。 关键词：黄花铁线莲皮素高效液相色谱法含量测定 黄花铁线莲为毛萇科植物黄花铁线莲Clematis intricata Bge.的地上部分，主要分布于内蒙古、辽宁、河 北、山西、陕西、甘肃、青海等地，多生于山坡、草地、路 边或灌木丛中。“黄花铁线莲”名称源于其植物名，其作为 蒙药“阿拉格-特木尔-敖日阳古”收载于《中华医学百科全 书》（蒙医分卷）《认药白晶鉴》《无误蒙药鉴》《内蒙古中草 药》和《内蒙古植物药志》［1］《中华本草》（蒙药卷）中。 主治胃痞、石痞、大肠痞、食痞等寒性痞症。现有研究表明, 桝皮素具有抗炎、抗氧化、抗癌和抗突变、抗心肌肥厚和降 血压等多种药理作用［2］。黄花铁线莲有效成分为楣皮素等 黄酮类物质，本实验采用高效液相色谱法测定其中桝皮素的 含量，以此方法控制蒙药材黄花铁线莲的质量。 一、 材料与仪器 1?材料黄花铁线莲（采自内蒙古呼和浩特市蛮汉山、 小井沟、五一水库，经内蒙古医学院药学院生药学教研室庞 秀生教授鉴定为毛蔑科植物黄花铁线莲Clematis intricata Bge.的地上部分），方法学考察中均采用蛮汗山所采集到的 样品。橱皮素对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号: 100081-200406）；甲醇为色谱纯，无水乙醇、磷酸、盐酸等 试剂均为分析纯，水为双蒸水。 仪器 依利特UV-230+高效液相色谱仪（大连依利特分 析仪器有限公司）：UV-230+紫外-可见检测器、P230/P230p 高压恒流泵、EC2000色谱工作站。601超极恒温水浴（江苏 省金坛市医疗仪器厂），电子天平（JA2003,上海天平仪器 厂）。 二、 方法与结果 1.色谱条件色谱柱：Kromasi 1 （250 mmX4. 6 inm, 5 um）,流动相：甲醇-0.4%磷酸（60 : 40）；流速：l.Oml/min； 检测波长：360 nm；进样量为20 u lo结果见图1?2。（略） 图1橱皮素对照品HPLC图谱（略） 图2黄花铁线莲HPLC图谱（略） 2 ?对照品溶液的配制 取12 0 ￡干燥4 h的桝皮素对照品 3 mg,精密称定，置10 ml容量瓶中，然后加甲醇至刻度， 摇匀，即得（每毫升中含桝皮素0. 307 mg）o 供试品溶液的制备 取本品1 g,过65目筛，精密称 定，加无水乙醇16ml, 9%盐酸4ml,加热回流两次，30 min/ 次，抽滤，合并滤液，置50ml容量瓶中，加9%盐酸至刻度, 摇匀，即得。 标准曲线的制备 精密吸取0.5, 1.0, 1. 5, 2.0, 2.5 ml对照品溶液分别置于10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇 匀。分别吸取20 U1注入高效液相色谱仪，记录峰面积。 以对照品溶液浓度为横坐标，对照品峰面积为纵坐标，进行 线性回归，标准线性回归方程为Y=89. 644X-71. 768 , r=0. 999 6实验表明桝皮素浓度在15.35?76. 75 u g/ml范 围内呈良好的线性关系。 5?精密度实验取供试品溶液，重复进样5次，记录峰 面积并计算，结果桝皮素的平均含量为1.858 7 mg/g, RSD 为 1. ll%o 6?稳定性实验取黄花铁线莲供试品溶液在0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9 h分别进样20 ul,记录峰面积，结果RSD为 1. 05%,表明桝皮素在9 h内保持稳定。 7.重复性实验取同一批供试品5份，各约lg,精密称 定，分别按样品提取方法提取、测定，结果橱皮素品均含量 为 1.832 mg/g, RSD 为 1.81%。 8?加样回收率实验 取已知含量的同一批供试品5份， 各约0. 5g,精密称定，分别加入桝皮素标准品溶液（0.586 mg/ml） 1.45 ml,按供试品溶液的方法处理并测定含量，计 算加样回收率，结果见表1 （略）。桝皮素平均回收率为 98. 13%, RSD为1.55%,结果表明本方法准确可靠。表1样 品中桝皮素含量加样回收率实验结果