蛋白质的性质实验一——蛋白质及子氨基酸的呈色反应.pptVIP

蛋白质的性质实验（一） ——蛋白质及氨基酸的呈色反应;一、实验目的 了解蛋白质的基本结构单位及主要连接方式 了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理 学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法;二、实验原理 双缩脲反应 两分子尿素加热到180℃左右时，生成双缩脲并放出一分子氮，双缩脲在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应;茚三酮反应 所有的α-氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质，除了脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质 该反应十分灵敏，是一种常用的氨基酸定量测定方法 该反应分为两步：第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮结合另一分子水合茚三酮和氨缩合生成有色物质;黄色反应（Pauly反应） 含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成深橙色的硝醌酸钠 多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸，所以有黄色反应，苯丙氨酸不易硝化，需加入少量浓硫酸才有黄色反应;考马斯亮蓝反应 考马斯亮蓝G-250具有红色和蓝色两种色调，在酸性溶液中其以游离态存在，呈棕红色；当它与蛋白质通过疏水作用结合后变为蓝色 考马斯亮蓝G-250染色灵敏度比氨基黑高3倍，反应速度快，约在2min左右时间内达到平衡，室温1h内保持稳定 在0.01～1.0mg蛋