材料与方法-政治大学.PDFVIP

材料與方法 一、受詴者 本研究相關實驗使用 Wistar品系之雄性大白鼠， 進行實驗時體重約在 300 ± 20 g 。 自國立台灣大學醫學院實驗動物中心購回後， 每一受詴飼養於國立政治大學心理系生理 心理實驗室動物房的不銹鋼個別鼠籠內。動物房內設定12/12 小時的晝夜周期，早上八 時至下午八時為光照期。所有的實驗均在早上 10點至下午 4點 之時段內進行，室溫維 持在攝氏22 ± 2度，並於實驗全期充分供應食物與飲水。實驗人員對動物福祉的規範參 照行政院農委會（ 1998）動物保護法相關規定，以及台灣心理學會（1996）公佈「心 理學專業人員倫理準則」的第五項有關動物實驗之規定與實驗動物管理及使用指南。本 研究所使用的動物實驗程序是經由國立政治大學動物實驗管理小組的審查通過而遵照 執行。 二、實驗儀器 實驗實主要使用的儀器為，壓克力觀察箱，外徑尺寸為長 56.4 cm 、寬31.4 cm 、 高 26.7 cm ，壓克力板厚度為0.7 cm 。恆溫水槽，內部尺寸為長29.5 cm 、寬23.5 cm 高 15 cm （廠牌：Firstek ，型號：B206－T1 ）。記錄動物行為反應的實驗過程則是使用 數位式攝影機（廠牌： JVC ，型號：GZ－MG740 ）。側腦室手術（intracerebroventricular cannulation ）所使用之腦部手術立體定位儀（stereotaxic apparatus ，廠牌：Stoelting ， 型號：51600 ）。 三、藥物 本實驗使用的藥物DAMGO（[D-Ala2,N-Me-Phe4,Gly5-ol]-enkephalin ）、bombesin （pGlu-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly -His-Leu-Met-NH2 ）、U-50488H （trans-(±)-3,4-dichloro-N-methyl-N-(2-[1-pyrrolidinyl-cyclohexyl)-benzeneacetamide ） 11 、GR 89696 （4-[(3,4-dichlorophenyl)acetyl]-3-(1-pyrrolidinylmethyl)-1 -piperazinecarboxylic acid methyl ester ）、naltrexone （(5a)-17-(Cyclopropylmethyl) -4,5-epoxy-3,14 -dihydromorphinan-6-one hydrochloride ）與nor-BNI （nor-binaltorphimine, 17,17-(Dicyclopropylmethyl) -6,6,7,7-6,6-imino-7,7 -binorphinan-3,4,14,14-tetrol dihydrochloride ）購自於TOCRIS （Bristol ，UK ）。 Diphenhydramine （2-Diphenylmethoxy-N,N-dimethylethylamine hydrochloride ）購自 於Sigma-Aldrich （St. Louis ，MO ，USA ）。這些藥物都以滅菌二次水（sterile water ） 調配完成。實驗中以 全身性注射藥物時，皆以腹腔注射（ intraperitoneal administration ） 給予大白鼠 1 mL/kg的注射量。 四、側腦室埋管手術 大白鼠在體重達 300 g 以上時，即接受側腦室埋管手術。首先大白鼠接受腹腔注射 1.5 mg/kg 劑量的Zoletil 50 （Virbac Taiwan ，Taipei ，Taiwan ）。側腦室埋管的植入 點以囪門算起 AP ：0.8 mm ，ML ：1.5 mm ，DV ：3.0 mm的座標點植入長 15 mm 之不銹鋼管（Shineteh ，Taipei ，Taiwan ） （McNally and Akil, 2002 ；Zhu et al., 2008 ）。而藥物給予時，注射針頭將突出鋼管底部1.0 mm ，即DV ：4.0 mm的座標點 進行注射程序 。並於頭骨表面栓入三個小螺絲釘作為支撐點，並以牙科膠固定鋼管的地 點。手術完成後，從大白鼠大腿部肌肉注射 60,000 U的 Penicillin （Y F