酶联免疫吸附试验（ELISA）原理.pptVIP

实验三 免疫标记技术 实验目的要求 1．掌握免疫标记技术的概念及常用方法； 2．熟悉ELISA常用方法及临床应用。 实验内容 1．免疫标记技术的原理和常用方法(电教) 2. 免疫荧光技术（示教） 3．ELISA双抗体夹心法测AFP（操作） 4．胶体金标记技术（早孕诊断-双抗体夹心一步法）（示教，操作） * 免疫标记技术是指用酶、荧光素、放射性核素、胶体金等标记抗体或抗原用以测定相应抗原或抗体的检测技术。常用的方法有免疫酶技术、免疫荧光技术、放射免疫测定技术、免疫胶体金技术等。此类技术具有特异、敏感、快速，能定性、定量和定位等优点，故在临床检验中得到了广泛应用。 酶联免疫吸附试验（ELISA）原理 是一种将抗原抗体反应的特异性和酶促反应的高效催化作用结合起来的方法。基本原理：先将抗体或抗原包被到固相载体表面，然后与待测样品中的抗原或抗体发生反应，再加入酶标抗体与载体表面的抗原-抗体复合物结合， 最后加入酶底物系统进行显色，根据颜色深浅或光密度(OD)值的大小进行定性或定量分析，从而得出待测标本中抗原或抗体的含量。 常用方法有双抗体夹心法——常用于测抗原 间接法——常用于测抗体 本试验以双抗体夹心法原理检测AFP，以协助原发性肝癌的早期诊断。 实验材料 1． ELISA试剂盒(购置)。 2．待测血清标本。 3.微量加样器、移液嘴、洗涤瓶、湿盒、温箱等。 操作流程 1.制备抗体包被板（试剂盒中所带） 2.加待测标本及标准品；加酶结合物(酶标抗体) 3.温育，37℃ 30min 4.漂洗,20s*5次 5.加底物反应系统，避光显色37℃ 5min 6.结果测定 E E E E E E E E 抗-AFP AFP E-抗AFP 双抗体夹心复合物 底物系统 实验结果 以肉眼初步观察结果：将待测孔呈现颜色反应与AFP标准品对照孔（20ng/ml和400ng/ml）颜色进行比较，从而判定待测孔中AFP的含量。也可用终止液终止酶促反应后，再用酶标仪读取OD值（波长450 nm，以空白孔调零），然后计算比值确定阳性结果。 正常人AFP的含量≤20ng/ml。 返回 实验报告 ELISA的原理、操作流程、结果及临床意义。 免疫荧光技术 *