课件：酶切连接与转化.pptVIP

限制性酶切、连接与转化 一、酶切1、核酸酶的分类： 核酸酶：通过切割相邻的两个核苷酸之间的磷酸二酯键，从而导致核酸分子多核核苷酸链发生水解断裂的蛋白酶。 核酸酶可分为两类：核酸外切酶（exonuclease）是从核酸的一端开始，一个接一个把核苷酸水解下来；  核酸内切酶(endonuclease)则从核酸链中间水解3’，5’磷酸二酯键，将核酸链切断。 ？ 如果内切酶可以切掉入侵的病毒DNA，为什么它们不会破坏宿主细胞自身的DNA 限制修饰系统 简称 R/M系统 restriction modification 类似于免疫体系，他能够识别自己的DNA和外来的DNA，并使外来的DNA降解。 由两种酶来控制：修饰的甲基转移酶和核酸限制性内切酶。 当外源的含有限制性酶特定位点的核酸进入细胞时，相应的核酸限制性酶就会将其解。但是菌体内的很多核酸也同样含有这样的序列，这时特异的甲基化酶就起作用了。甲基化酶在内源的部分核酸还没被限制以前就被甲基化了，这种甲基化核酸序列是限制性酶无法作用的。 2、 限制性酶切的原理： 限制性核酸内切酶（restriction endonuclease）能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链D