课件：酶动力学分析.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 按同样的推导方法求出下述方程式： ( 2-顺序 ) 式中： Km—S1为单底物时的米氏常数，mol/L; KmS1—S2浓度饱和时，S1的米氏常数，mol/L; KmS2—S1浓度饱和时，S2的米氏常数，mol/L; 大部分脱氢酶属于顺序机制。 ③乒乓机制 最主要特点是底物S1和S2始终不同时与酶结合。酶E与底物S1生成复合物，产物P的脱离在另一底物S2的加入之前。机理可表示如下： E+S1 ES1 E*+S2 E*S2 式中：E*——修改过的酶； 这种构型的修改有利于酶与S2相结合，当生成第二个产物P2以后，酶又从E*恢复到E构型，以有利于与S1相结合。推出其反应速率方程式为： ( 1- 乒乓 ) 综合上述各种双底物酶催化反应动力学的形式，Dalziel提出一普遍化公式为： ( 双底物普遍式 ) 式中：rS0—反应的初始速率； θi—包括动力学速率常数的参数； 2、变构酶催化反应动力学 变构酶又称调节酶，它是一种寡聚酶。这类酶具有变构部位和活性部位。当底物分子与这类酶结合时，能诱导酶的结构改变，增加酶与底物的结合能力，表现出底物对酶的激活效应。如磷酸果糖激酶、天冬氨酸转氨甲酰酶、苏氨酸脱氨酶、己糖激酶等。变构酶的作用机理十分复杂。已提出的模型有渐变模型、同构模型等。描述变构酶催化反应动力学用Hill方程。 Hill方程表示为： 式中：n—Hill指数。 n表示了每个酶分子与底物结合部位的数目，通常为1～3.2之间，当n=1时，Hill方程与M-M方程相同。 KH为一常数，它由米氏常数Km和所结合底物相互作用的因子组成，也可表示 ( 2-变构 ) 用Hill方程的对数式可估计其模型参数n和KH值。对Hill方程移项并进行整理、取对数，可得下式： 用 对 作图，（右图），得到斜率是n和截距是 的直线。所求得的n值不一定是整数。 Hill方程是一经验性方程。根据式2-变构，以rS/rmax为纵坐标， 为横坐标对应作图，得到如下图所示的曲线，这些曲线的形状与n值有关，当n=1，曲线为双曲线（即M-M曲线），随着n值增大，曲线的S形状愈加明显。 后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！ 致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 对于非竞争性抑制，由于抑制剂的作用使最大反应速率降低了 倍，并且CI增加、KI减少都使其抑制程度增加。此时rSI对CS的关系如图2-6所示。 根据L-B作图法，式( 2-非竟抑制 )可整理为： 或 以 与 作图，可得如图所示的直线关系。并求出Km和r I,max值。 又根据 通过实验测得不同CI下的rI，max值，进而决定KI值。 如果三元复合物[SEI]也能分解为产物，则在机理式中增加了一步 ，同样可整理成形式上与( 2-非竟抑制 )类似的速率方程式，所不同的仅是rI,max所包含的参数上。 如何判断复合物[SEI]是否分解为产物，可通过改变抑制剂用量，并测定底物的反应速率来判断。 非竞争性抑制与竞争性抑制的主要不同点是： 对竞争性抑制，随着底物浓度的增大，抑制剂的影响可减弱； 而非竞争性抑制，即使增大底物浓度也不能减弱抑制剂的影响。 由此可见，竞争性抑制作用是可逆的，非竞争性抑制作用是不可逆的。 根据实验数据判别竞争性抑制和非竞争性抑制 ③反竞争性抑制动力学 反竞争性抑制的特点是抑制剂不能直接与游离酶相结合，而只能与复合物[ES]相结合生成[SEI]复合物。 根据拟稳态假设和物料平衡，经整理后可得到其速率方程为 或 （3-反竟抑制） 根据上述各定义式，可以推出： 以rSI对CS作图，得到下图所示曲线。 根据L-B作图法，式（3-反竟抑制）可改写为 以1/ rSI对1/CS作图。利用该图求取动力学参数。 ④线性混合型抑制动力学 线性混合型的最简单机制可用下式表示： 在上述机理中， 从左式来看，它基本上与非竞争性