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人参皂昔Re胶体金免疫检测试纸条制备和应用 ［摘要］利用胶体金标记的经饱和硫酸铁纯化的 人参皂昔Re单克隆抗体、人参皂昔Re-牛血清白蛋白 (GRe-BSA)、羊抗鼠IgG制备了人参皂昔Re胶体金免疫检 测试纸条。该试纸条的最低检测极限为200 Pg-L-lo检测 时间10 min。取10 mg不同年份的人参样品分别用5 mL自 来水提取30 min,分别用试纸条和酶联免疫检测法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay , icELISA)检测。结果为：直接用试纸条测定上清液可区别 真伪人参；上清液稀释100倍，用试纸条可区分出人参质量 优劣。试纸条检测结果和酶联免疫检测方法测定结果完全一 致。所制备的胶体金免疫检测试纸条可以用于人参的快速真 伪鉴别和质量优劣判断。 ［关键词］人参；单克隆抗体；试纸条 ［收稿日期］2013-03-06 ［通信作者］*王保民，教授，主要研究方向为免疫技术 在植物研究上应用，Tel: ( 010 ), E-ma订： wbaomin@263. net人参是一种传统的名贵中药材，其药用历 史在我国已有2 000多年，常用于改善心血管系统和内分泌 系统、促进代谢、抗肿瘤和抗氧化作用等［1-2］ o人参皂昔 是人参的主要有效成分之一，具有广泛的生物活性和医疗用 途，其含量因药用部位、加工方法、栽培年限和产地而异。 人参皂昔Re是人参皂昔中的重要单体成分之一，也是人参 中非常重要的活性物质之一，具有扩张血管、降低胆固醇含 量、抗衰老以及促进CD4+ T细胞增殖的作用［3］。目前，市 场上中药造假泛滥，假冒和伪劣人参充斥市场，急需建立一 种高效、灵敏的检测方法用于人参真伪快速鉴别和质量优劣 判断。胶体金免疫检测试纸条已广泛应用于兽药残留［4］、 农药残留［5］和中草药有效成分［6-7］等的现场快速检测。本 研究拟利用已经制备好的人参皂昔Re单克隆抗体，通过与 胶体金的标记制备免疫检测试纸条并用于人参的现场快速 筛选。 1材料 人参皂昔Re （ginsenoside Re, GRe）（中国食品药品检 定研究院），人参皂＜ Re单克隆抗体和人参皂昔Re-BSA联 结物由本室制备，其中抗体为IgGl,轻链为k型。与人参 皂昔Rgl, Rd, Rf的交叉反应率分别为89. 6%, 2. 8%, 2.6%。 牛血清白蛋白（BSA）、羊抗鼠IgG为Sigma公司产品。样品 垫、金标垫、NC膜、吸水垫、底版、20 nm胶体金溶液（未 标记）等均为上海杰一生物技术有限公司产品。多年生栽培 人参采自吉林省抚松县，由吉林省农业科学院李刚研究员惠 赠。 包被缓冲液：0. 05 mol ? L-1碳酸盐缓冲液(pH 9. 6)； PB： 0.01 mol - L-1 磷酸盐缓冲液(pH 7. 5)； PBS：含 0. 9% NaCl 的 0. 1 mol ? L-1 磷酸盐缓冲液(pH7. 5)；洗液(PBST): 含有0. 1%聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯(吐温-20)的PBS； 样品稀释液(PBSTG)：含有0.5%明胶的PBST； TMB显色溶液 购自美国Sigma公司；终止液：1 mol ? L~1 HC1O 台式划膜喷金一体机、切膜机均为上海杰一生物技术有 限公司产品。 2方法 1抗体的纯化 采用饱和硫酸铁沉淀法对小鼠腹水进行纯化[8], 0.01 mol?L-1 pH 7.4的PB充分透析后再用蒸馆水透析2次除去 硫酸鞍。纯化后的抗体冷冻干燥，-20 °C保存。使用前用0. 01 mol ? L-1 pH 7.4 的 PB 溶解。 2.2胶体金的标记 用 0. 1 mol ? L-1 的 K2C03 和 0. 1 mol ? L-1 的 HC1 调节 胶体金溶液至pH 8. 2o取抗体溶液，用0. 01 mol ? L-1 pH 7. 4 PB将抗体稀释至1 mL,逐滴加入到20 mL胶体金溶液中， 使其最终质量浓度为2. 0 mg ? L-1,继续搅拌45 min。加入 10%的BSA溶液使其最终浓度为0. 5%,继续搅拌60 min。5 000X g离心30 min,除去上清液，将沉淀悬浮于1 mL的 含 0. 5% BSA 和 0. 05%叠氮化钠的 0. 01 mol ? L-1 pH 7. 4 PB 中，置4 ￡下保存。 2.3胶体金免疫检测试纸条的调试与制备 用台式划膜喷金一体机分别在NC膜和金标垫上喷不同 浓度的人参皂昔Re-BSA联结物、羊抗鼠IgG和胶体金标记 抗体，分别组装试纸条。检测不同浓度的人参皂昔Re标样 和空白对照样品，通过观察检测线和对照线筛选人参皂昔 Re-BSA联结物和胶体金标记抗体的最佳浓度。