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病理组织免疫组化技术初讨 【摘要】近年来，在对肿瘤进行诊断、分类以及预 后等方面，病理组织免疫组化技术得到了较为广泛的应用， 该方式对提升医学诊疗的准确性和有效性具有积极效果。本 文主要将我院在病理组织免疫组化检测技术上的一些经验 与大家共同分享，以期积极推进其合理应用。 【关键词】病理诊断免疫组化分析研究 【中图分类号】R36 【文献标识码】A 【文章编号】2095-6851 (2014) 04-0587-01 近年来，病理免疫组化技术得到了越来越广泛的应用， 该方法可以极大地提高临床治疗效果，对于促进患者尽快康 复具有积极意义。总体来说，该方式是目前组织标本制作方 面比较理想的一种方式［1］。免疫组化作为一个综合性的操 作技术，具有较多的反应步骤和较为复杂的影响因素，在进 行操作时，要求技术人员充分按照规程进行，要不断加强全 程控制。我院积极进行了实践，取得了一定的经验。具体情 况如下。 1免疫组化操作过程 1. 1固定标本固定标本的基本作用，就是确保组织细 胞本身形态完整，防止其发生负面变化。这一步是进行病理 诊断的基础，对诊断结果的准确性和免疫组化的有效性均具 有极为重要的影响。具体来说，要注意以下几个方面的因素: ①在标本脱离本体后要立即进行固定，时间控制在15分钟 以内。固定液采用比例为10%的中性福尔马林，其用量必须 控制在标本的5-10倍。②要把握好标本的固定时间。手术 离体标本固定时间一般为12-24h,最大限度为72h。研究表 明，如果标本固定时间超过1周，将导致组织细胞抗原决定 簇被覆盖，从而无法进行检测。③要注意准确把握固定液的 种类以及浓度。进行免疫组化，一般采用浓度为10%的中性 甲醛。固定液的浓度要保持一定的度，过高或者过低，都会 对组织造成一定的影响，导致组织的有效成分丢失挥着无法 实现准确的背景着色等，对最终结果造成不良影响。④在进 行标本固定时要正确处理。比如，在固定淋巴组织时，要切 开包膜，否则将会对固定液的渗透造成不良影响。有些大标 本在进行固定时没有切开，将导致固定不均匀，从而影响染 色效果。 1.2切片、烤片与脱蜡①确保切片质量。有价值的切 片不仅要薄，而且要完整。要确保将病变组织准确完整地切 出来，才可以在染色的时候做到有的放矢。一般情况下，切 片厚度大约为3-4umo②确保切片皱褶平整。如果切片边缘 位置发生卷曲，则将导致试剂无法完全冲洗，每各阶段的试 剂均可能在不平整位置残留，最后在显色时，这些地方着色 效果就会受到严重影响，无法准确进行判断。③保证清洁。 要确保所使用的水源一级器具均达到清洁要求，防止对切片 造成的污染，影响最终效果。④控制好温度。烤片温度要适 当，过低则无法实现效果，容易造成脱片，过高则对效果造 成严重影响，使抗原丢失。一般维持65€烘烤1小时就可以 开始染色。⑤妥善脱蜡。脱蜡要把握好分寸，如果不彻底， 蜡膜就将阻止抗体进入组织，影响最终效果。可以采用三级 松节油，每级脱蜡8分钟，效果比较理想。 1. 3减少或清除非特异性染色如果组织中非抗原抗体 反应出现阳性染色，则属于非特异性背景染色。发生这一情 况的主要原因是蛋白吸附在高电荷的胶原和结缔组织上。这 种情况下，可应用0.3%的双氧水封闭。0.3%的双氧水作用比 较缓和，不会影响染色以及抗原。 1.4抗原修复修复方法主要是加热。具体的工具包括 高压锅、微波炉等。通过加热，对氢键进行修复，从而使组 织中的抗原决定簇显示出来。高压锅热修复应用较多：先在 锅中加入0. 01M, pH6.0的柠酸盐缓冲液共计2000ml,加热 直到沸腾，再放入切片，盖上并加减压阀。保持火源，在减 压阀冒汽2分钟后熄火、冷却。再将切片取出进行下一步工 作。 1.5 一抗的选择大多数科室都使用的即用型抗体，值 得注意的是不同公司的一抗作用是不一样的，就是同一家公 司的抗体，也是有些效果好，有些效果差。这就需要多选择 几家公司进行比较，择优使用。使用浓缩型的抗体的时候， 在使用前，需要进行不同浓度配比实验，找到最佳浓度配比 后才进行配置试剂。使用一抗后，我科建议切片在4摄氏度 的冰箱内过夜。 1. 6显色DAB显色液应当在使用之前进行配置，时间控 制在30分钟之内。如果显色液发生棕色沉淀，则表明其已 经失效。在对显色进行观察时，阳性部位较多的组织显色极 为迅速，1-3分钟就会显示棕色，此时立即终止。阳性部位 稀少的组织，则要借助显微镜进行观察，时间控制在10-15 分钟。 1.7复染衬托免疫组化的阳性染色，使组织结构清晰 易于观察。 2免疫组化质量控制 2.1保证染色切片质量切片质量是影响临床判断的一 个重要因素。在进行染色切片时，需要医生和技师的相互配 合。医生要正确进行组织选取和对照设置，准确地对结果进 行分析和进行技术指导；技术