细胞凋亡检测方法新进展-中国细胞生物学学报.PDFVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2011, 33(5): 564-569 http ://www.cj 细胞凋亡检测方法新进展 高 超　华子春* (南京大学医药生物技术国家重点实验室, 南京2 10093) 摘要 细胞凋亡是生命科学研究的热点之一, 检测细胞凋亡的方法层出不穷。目前, 用于体 外细胞凋亡检测的方法已相对成熟, 比如: 流式细胞术、TUNEL检测法、DNA 片断检测等。而用 于体内细胞凋亡检测的试剂则正在研究之中, 各种检测试剂不断出现。其中, Annexin V 、Synap- totagmin I-C2A 、ApoSense 家族分子与其他检测试剂相比具有一定的优势。该文在介绍几种常用 的体外细胞凋亡检测方法的同时, 重点介绍上述三种试剂。 关键词 细胞凋亡; Annexin V; synaptotagmin I-C2A; ApoSense 1 引言 体被周围细胞吞噬, 无细胞内容物外泄。因此, 不同 细胞凋亡(apoptosis)又称程序性细胞死亡(pro- 于坏死, 细胞凋亡过程中的形态学和生化变化可以 grammed cell death, PCD), 是细胞在一定生理或病理 很大程度地减轻对组织的损害[4] 。 条件下, 按照自身程序主动性、生理性的死亡过程。 最初人们仅从形态学特征的改变加以认识, 如 细胞凋亡涉及一系列基因的激活、表达以及调控, 细胞核皱缩、染色质凝集、细胞膜翻转、DNA片段 是细胞为更好地适应生存环境而采取的主动死亡过 化、线粒体肿胀和凋亡小体形成等。进一步的研究 程。细胞凋亡不仅在胚胎发生、器官发育及机体免 表明细胞凋亡涉及一系列复杂的生化反应, 是一个 疫等过程中至关重要, 而且在心血管病变、神经性 需要一系列酶参与的级联反应, 涉及不同基因的表 病变、肿瘤的发生等疾病中起重要作用[1] 。一些通 达及调控、信号传导[2] 。目前已知的凋亡通路包括 过激活或抑制细胞凋亡来治疗疾病的方法不断出 线粒体通路、死亡受体通路和内质网通路。线粒体 现, 如Caspases 的激活剂或抑制剂、Bcl-2和survivin 在凋亡过程中扮演重要角色, 如Caspase激活因子的 的反义RNA 、重组的TRAIL等[2] 。因此, 研究细胞 释放、电子传递链的变化、线粒体膜电位的去极化、 凋亡对基础研究和临床应用有重要价值。体外细胞 细胞的氧化还原反应。线粒体膜上具有调控凋亡的 凋亡检测的方法已相对成熟, 比较常用的方法是应 Bcl-2家族蛋白, 该蛋白的结合状态将调节线粒体膜 Annexin V-FITC PI C(cytochrome C Cyt C) 用 与 双标记结合流式细胞术检测 电位的变化, 改变细胞色素 , 细胞凋亡。体内细胞凋亡检测目前还处于成长期, 等的释放, 从而通过激活Caspase通路导致细胞凋亡, 但在临床应用上的价值则日益凸显[3] 。本文在介绍 或直接作用于细胞核引起细胞凋亡。 细胞凋亡的形态和生化特征改变的基础上, 综述了 常用的体外检测方法, 并重点介绍体内凋亡检测方 3 细胞凋亡的体外检测 法中尚处于研究阶段的三类分子。 3.1 形态学检测 细胞凋亡与坏死的区别最早是通过电子显微 2 细胞凋亡的形态学和生化特征变化 镜(electron microscopy, EM)发现的。电镜