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* PMID:* * * * * * * * * * * * * * * * From Training review doc * * * From Global Lung Council * From Global Lung Council * From Global Lung Council * * * * * * * * * Based on ALK Resistance Workshop slides (slide 5) * Sasaki manuscript at: /content/early/2011/07/25/0008-5472.CAN-11-1340 * * * * * EML4-ALK的FISH检测中需注意的问题 至少计数50个肿瘤细胞以确保结果的精确性 1 如果红色和绿色探针分离 2个信号直径 ,则认为FISH信号为阳性1 ALK 重排可能遍及整个肿瘤而非局部2 约5%-11%的细胞会出现假阳性分离1,2 ALK重排细胞比例的增加与克唑替尼治疗的肿瘤缓解程度并无关联3 Varella Garcia et al., IASLC 2011; Abs #MTE36.1 2. Camidge et al., Clin Cancer Res 2010; 16:5581-5590 3. Camidge, IASLC 2011; Abs #MO04.04 FISH病理报告实例:显示 EML4-ALK 融合 Courtesy I. Wistuba 肺癌QQ群2970957 FISH病理报告实例:显示无EML4-ALK 融合 病理报告要使用准确的语言,如 “EML4-ALK 重排 15%” “ALK 异常” 还包括其他变异,如ALK基因拷贝数增加,此变异未被确认为对ALK抑制剂应答的预测性标记物1 Courtesy I. Wistuba 1. Raftopoulos et al., IASLC 2011, Abs #O05.06 肺癌QQ群2970957 免疫组织化学(IHC) 检测ALK表达 使用高敏感度检测系统后,越来越多的数据支持IHC可用作初步筛查的方法 敏感度和特异度可达100%,尽管在不同研究中存在差异 与FISH相比,IHC是一种更常规的技术,成本低、工作量相对小 ALK IHC FISH 患者 1: IHC显示ALK表达量高, FISH显示重排 患者2: IHC显示无ALK表达, FISH显示无重排 Mino-Kenudson Clin Cancer Res 2010; 16:1561-1571. 肺癌QQ群2970957 IHC需要标准化 从临床试验过渡到大规模使用IHC 前,还需要对以下方面进行规范: 最好的抗体和检测系统是什么 应采用哪种评分系统 有哪些生物学相关的截止点 采用适当的质量控制 抗体 研究数量 供货商 敏感度范围 特异度范围 ALK1 8 Dako 9%-100% 97%-100% 5A4 6 Abcam, Novocastra 18%-100% 96%-100% D5F3 1 Cell Signaling 100% 99% Adapted from Yi et al., J Thorac Oncol 2011; 6:459-465 and Mitsudomi et al., ASCO 2011, Abs #7534 研究中的检测ALK重排的其他检测方法 多重 RT-PCR用于筛查所有ALK 融合变异体1,2 显色原位杂交技术(CISH) 3 使用标准明视野显微镜, 数据可存档 465例样本结果显示与FISH (k=0.92) 和IHC (k=0.82)高度一致 分离型CISH 探针显示ALK 重排 Takeuchi 等报道的新发现的EML4-ALK变异体4的RT-PCR结果 1. Takeuchi et al., Clin Cancer Res 2008; 14:6618-6624 2. Li et al., ASCO 2011; Abs #10520 3. Kim et al., IASLC 2011; Abs #O05.02 EML4-ALK融合变异体 V1 V2 V3A V3B V4 V5A V5B V6 V7 EML4-ALK.V1 +++ - - - - - - - - EML4-ALK.V2 - +++ - - - - - - - EML4-ALK.V3A - - +++ - - - - - - EML4-ALK.V3B - - ? +++ - - - - - EML4-ALK.V3AB - - +++ ++
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