负载BMP与VEGF的PDLLA组织工程材料修复兔桡骨缺损的实验分析.pdfVIP

负载BMP与ⅦGF的PDLLA组织工程材料修复兔桡 骨缺损的实验研究 研究生：王代宪 专 业：外科学(骨科学) 指导教师：张永先(副教授) ． 中文摘要 目的1．采用兔骨髓组织，通过梯度离心法获取骨髓基质细胞，在体外培养传代， 观察该细胞的生物学特性及成骨能力。 · 2．研究新型多孔超聚消旋聚乳酸(PDLLA)支架材料的体外细胞相容性，探讨制 备负载BMP及VEGF的PDLLA支架材料可行性。 骨缺损的修复试验并探讨在动物体内成骨的量效关系，以得到一种较好的可吸收骨构 建材料。 方法1．抽取新西兰兔骨髓，用全骨髓培养法获取单核细胞，经条件培养液体外 诱导、扩增。通过倒置相差显微镜、细胞染色、扫描电镜观察细胞生长及细胞与材料 的附着情况，并绘制细胞生长曲线(Mar法)检测各组细胞增殖和细胞周期变化情况。 采用碱性磷酸酶染色(ALP)和I型胶原免疫组化染色进行骨髓基质细胞成骨特性的鉴 定。 133arrowstromal 2．贴壁法培养兔骨髓基质细胞(bone cells，BMSCs)，经体外矿化 性玻璃陶瓷材料BOC)及对照组(空I刍PDLLA)分别进行体外复合培养；并通过定性及 定量检测细胞在材料表面的粘附能力、增殖活力，验证细胞材料复合体的成骨活性， 比较分析各组支架材料之问的差异。 3．制备新西兰大白兔右挠骨中段12mm骨缺损实验模型，随机分为实验组、对照 BMSCs的PDLLA，空白组仅制作骨缺损模型，不植入任何成骨材料。术后对动物进行 大体观察、摄x线片观察各组不同时相骨缺损修复情况、比较不同时相的骨缺损区x 线阻射密度、并于术后第4，8，12周取出骨缺损区标本进行大体观察和组织学切片观 察，图像分析骨小梁的生数量，并取第12周标本进行生物力学检测。 结果1．兔骨髓基质细胞经条件培养液体外诱导、扩增，骨髓基质细胞ALP染色 阳性率超过80％，体外培养的细胞能合成较多量I型胶原，均表明所获得的骨髓基质 细胞是成熟的成骨细胞，可以做为骨组织工程中一种良好的种子细胞。 2．兔BMSCs在三组支架材料的表面均能生长，经体外诱导后在支架材料的表面 形成钙结节，实验组A与B细胞的粘附及增殖能力均强于对照组(阳O．05) PDLLA与PDLLA在术后各时期骨形成评分高于对照!fl(p0．0D． 结论1．所获得的骨髓基质细胞是成熟的成骨细胞，可以做为骨组织工程中一种良 好的种子细胞。 的组织工程材料。 种有临床应用前景的骨移植材料。 关键词超聚消旋乳酸；细胞相容性；骨髓基质干细胞；骨形态发生蛋白；量效 关系；血管内皮生长因子；生物活性玻璃陶瓷；骨缺损； 2 Studiesonanewtissue boneloadedwith Experimental engineering factor bone andvascularendothelial morphogeneficprotein growth dai．xian Name：晒刀g Supervisor：Zhangyong—xian ABSTRACT searcha seededcellofbonetissue 1．To kindofideal engineering． o