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临床微生物检验技术进展 一、临床微生物病原体的快速诊断 虽然对“快速”的时间长短没有正式的定义，但是大多数人期望快速的系统能在4h内提供可用的结果。通常微生物的繁殖时间（通常是30min或更长时间）不允许那些依赖微生物生长与否的检测方法，在短时间内产生可检测的生化反应。为了克服这一问题，必然使用全新的底物，检测待测菌产生的酶或蛋白质，从而在1～4h内检测出应答反应。 （一）细菌与真菌的快速诊断 1、质谱技术 传统的形态学检测技术 经典的利用酶学的生化反应技术 生化反应 编码技术 碳指纹技术 质谱技术（MALDI-TOF MS） Bruker Daltonik,microflex Biotyper (Billerica, MA, USA) bioMerieux Vitek MS (Durham, NC, USA) the Andromas SAS (Paris, France). The former two instruments are available in the USA and received clearance from the Food and Drug Administration (FDA) for certain groups of microorganisms. （1）在需氧/兼性厌氧的革兰阳性杆菌应用 棒杆菌属菌可准确鉴定。 MALDITOF MS可以鉴定分枝杆菌，这种检测需要特殊处理以杀灭待测菌（出于安全等考虑）、打散细胞聚集团块以及裂解细胞外壁（envelopes）等。MALDITOF MS应该能够鉴定大多数临床相关的分枝杆菌菌种。 （2）在需氧/兼性厌氧的革兰阳性球菌应用 MALDI-TOF MS对葡萄球菌（Staphylococci）、β-溶血性链球菌(b-hemolytic streptococci、气球菌(Aerococci和肠球菌(Enterococci)的整体鉴定性能都是极佳的。而对一些α-溶血性链球菌(a-hemolytic streptococci)有困难。 布鲁克系统可能难以区分缓症链球菌(S. mitis)、口腔链球菌(S. oralis)与肺炎链球菌(S. pneumoniae) ；而VITEK MS系统则可以克服这一局限。尽管MALDI-TOF MS在种群水平上能够可靠地鉴别草绿色链球菌(viridans group streptococci)，但它可能无法区分一些密切相关的种。其它链球菌，如乳链球菌(S. canis)、停乳链球菌停乳亚种(S.dysgalactiae)、化脓性链球菌(S. pyogenes)和S.infantarius、马肠链球菌(S. equinus)和S.lutetiensis等，彼此可能无法很好地区分开来。 （3）在需氧/兼性厌氧的革兰阴性杆菌应用 阴沟肠杆菌复合体 植生拉乌尔菌、解鸟氨酸拉乌尔菌 巴策尔弓形杆菌 弯曲杆菌种 小肠结肠炎耶尔森菌 二氧化碳嗜纤维菌 洋葱伯克霍尔德菌 气单胞菌 HACEK菌群 沙门菌属内鉴定通常是不可行的，但是它可区分 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi和其它S. enterica serovars。 Shigella and E. coli are so closely related that Shigella is not identified by MALDI-TOF MS. To differentiate, colonies should be examined for lactose fermentation,motility and a spot indole. If positive an identification of E. coli is appropriate. If negative for these tests, Shigella should be suspected and an agglutination with Shigella antisera performed. （4）在厌氧菌应用 MALDI-TOF MS技术可用于鉴定许多临床相关的厌氧菌。 Jamal等报道使用布鲁克v3.3和生物梅里埃v1系统/v1.1数据库对274株常规分离厌氧菌（多属于Bacteroides fragilis）的鉴定准确率分别为89%和100%。 （5）在酵母菌应用 MALDI-TOF MS可以鉴定酵母菌，且性能优于一些传统的表型鉴定系统。它可以鉴别都柏林假丝酵母菌(C. dubliniensis)和白假丝酵母菌(C.albicans)；皱折假丝酵母菌(C.rugosa)和近邹褶假丝酵母