过量表达DXPS和DXR基因对烟草类萜代谢的影响研究-植物营养学专业论文.docxVIP

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2019-04-05 发布于上海
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过量表达DXPS和DXR基因对烟草类萜代谢的影响研究-植物营养学专业论文.docx

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万方数据万方数据 3.1.3 主要试剂........................................................................................................................................28 3.1.4 主要缓冲液配方........................................................................................................................... 28 3.2 研究采取的技术路线.......................................................................................................................... 29 3.3 试验方法................................................................................................................................................30 HYPERLINK \l _TOC_250013 3.3.1 DXPS 和 DXR 基因的化学合成设计 30 HYPERLINK \l _TOC_250012 pSH737-DXPS-DXR 载体构建 30 HYPERLINK \l _TOC_250011 质粒 DNA 的提取 30 3.3.4 感受态细胞制备及转化............................................................................................................... 30 3.3.4.1 大肠杆菌感受态细胞制备与转化......................................................................................... 30 3.3.4.2 根癌农杆菌菌株 LBA4404 感受态的制备及 DNA 转化 31 3. 3.5 烟草遗传转化...............................................................................................................................31 3.3.6 转基因烟草植株检测................................................................................................................... 31 HYPERLINK \l _TOC_250010 3.3.6.1 转基因烟草植株的 PCR 检测 31 HYPERLINK \l _TOC_250009 3.3.6.2 转基因植株 GUS 组织化学检测 32 HYPERLINK \l _TOC_250008 3.3.6.3 转基因植株的 Southern blot 检测 32 HYPERLINK \l _TOC_250007 3.3.7 转基因植株的总 RNA 提取及目的基因的 RT-PCR 分析 33 HYPERLINK \l _TOC_250006 总 RNA 提取 33 HYPERLINK \l _TOC_250005 cDNA 合成 34 HYPERLINK \l _TOC_250004 RT-PCR 检测目的基因表达 34 3.3.7.4 GC-MS 测定转基因烟草叶面提取物 34 3.4 结果与分析............................................................................................................................................35 HYPERLINK \l _TOC_250003 DXPS –NOS 和 35S-DXR 基因的设计与合成 35 HYPERLINK \l _TOC_250002 pSH737-DXPS-DXR 载体的构建 35 3.4.3 转基因