海参脑苷脂对阿尔茨海默症模型小鼠脑组织相关鞘脂的影响分析-食品工程专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 独创声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导 下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知 ，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得其他教育机构的学位或证目 使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了 明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名 :即始感 签字日期 :马!乌年 μ? 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意以下 事项 : l、学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许 论文被查阅和借阅。 2、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以 采用影印 、缩印或扫描等复制手段保存 、汇编学位论文。同时授权清华大学中 国学术期刊(光盘版)电子杂志社用于出版和编入 C汗KI 中国知识资源总库)) ， 技权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 口川【〈VI!月rIOPM期口H户子 口川【 〈VI! 月 rIO P M 期 口H 户子 签 日川【 〈Vt! 月 fb wv uw 期 口u 签 万方数据 万方数据 海参脑苷脂对阿尔茨海默症模型小鼠脑组织相关鞘脂 的影响分析 摘 要 海参脑苷脂（SCC）是一类结构独特的鞘脂类化合物，具有抗肿瘤、免疫调 节、抗菌、心血管保护等作用。目前，其神经保护作用引起关注，并有望开发成 为改善老年性脑功能衰退的药物。阿尔茨海默症（Alzheimer‘s disease，AD）是 一种原发性退行性疾病，发病原因及机理复杂，发病率逐年增加，已成为不可忽 视的社会问题。已有研究表明，鞘脂代谢的异常与 AD 密切相关。本论文主要利 用 LC-MS/MS 技术，研究 SCC 对 AD 小鼠脑组织相关鞘脂含量及分子种的影响， 从鞘脂组学方面探究 SCC 对 AD 的改善作用。 建立了小鼠脑组织中主要鞘脂含量测定的简便准确的正相液相色谱-质谱联 用方法（NPLC-MS/MS）。以 Agilent RX-SIL 柱（2.1 mm × 100 mm，1.8 μm） 为分离柱，氯仿/甲醇/氨水（89.5/10/0.5，v/v）、氯仿/甲醇/水/氨水（55/39/5/0.5， v/v）为流动相，实现了脑苷脂、神经酰胺、硫苷脂、鞘磷脂等 4 类鞘脂的分离 和定量。采用该方法，对正常组、模型组、实验组的鼠脑的海马及皮质的上述鞘 脂进行分析。结果表明，模型组相对正常组，其海马和皮质的脑苷脂含量分别下 降 23.96%和 24.23%，神经酰胺含量分别升高 67.96%和 10.15%，硫苷脂含量分 别下降 54.82%和 23.39%，鞘磷脂含量无明显变化。实验组相对模型组，海马中 脑苷脂含量有上升趋势，神经酰胺含量下降 32.79%，硫苷脂含量上升 45.38%， 鞘磷脂无显著性差异。 建立了小鼠脑组织中脑苷脂、神经酰胺、硫苷脂分子种分析的反相色谱-质 谱联用方法（RPLC-MS/MS）。以 Agilent Eclipse Plus C18 柱（2.1 mm × 50 mm， 1.8 μm）为分离柱，以甲醇/水（97/3，v/v，含 0.5%甲酸和 5 mmol/L 甲酸）为流 动相，实现了对脑苷脂和神经酰胺分子种的分析，以甲醇/异丙醇/水（85/10/5， v/v，含 0.5%甲酸和 5 mmol/L 甲酸）为流动相实现了对硫苷脂分子种的分析。对 于脑苷脂、神经酰胺、硫苷脂的定性，除采用质谱子离子扫描和母离子扫描模式 外，利用分子种在色谱柱上的保留时间对其结构进行鉴定，大大提高了各分子种 结构分析的效率。另外，采用 MRM 模式，对正常组、模型组、实验组的脑苷脂、 硫苷脂、神经酰胺分子种定量，筛选出潜在的鞘脂标志物：羟基化脂肪酸型脑苷 脂/非羟基化脂肪酸型脑苷脂（HFA-GalCer/NFA-GalCer）、神经酰胺 d18:1-C18:0、 硫苷脂 d18:1-C24:1 、 羟 基 化 脂 肪 酸 型 硫 苷 脂 / 非 羟 基 化 脂 肪 酸 型 硫 苷 脂 （ HFA-Sulf/NFA-Sulf ）、 超 长 链 脂 肪 酸 型 硫 苷 脂 / 长 链 脂 肪 酸 型 硫苷脂 （ VLFA-Sulf/LFA-Sulf ）。 模 型 组 相 对 正 常 组 ， 海 马 及 皮 质 的 HFA-GalCer/NFA-GalCer 分别升高 25.13%和 14.36%，Cer-d18:1-C18:0 分别升高 30.63% 和 10.49% ， Sulf-d18:1-C24:1 分 别 降 低 43.31% 和 30.26% ， HF