糖原合成酶激酶3βglycogensyntheseskinase-第三军医大学学报.DOC

GSK3β促进TGF-β1诱导的肾小管上皮HK-2细胞纤维化 赵 凯1，2，龚如军3，陈 姗1，何凤田1 （400038 重庆，第三军医大学基础医学部：生物化学与分子生物学教研室1，病原生物学教研室2；Division of Kidney Disease and Hypertension， Brown University School of Medicine， Providence， Rhode Island 02903， USA 3） [摘要]目的 阐明GSK3β对于肾脏小管间质纤维化的作用。 方法 以TGF-β1诱导的体外肾小管间质纤维化模型为研究对象，通过以GSK3β特异抑制剂LiCl处理细胞和不同GSK3β表达质粒（野生型GSK3β表达质粒GSK3β-WT；第9位点上丝氨酸突变为丙氨酸，由此不再能被磷酸化失活而具有固有活性的GSK3β突变质粒GSK3β-S9A；第85、86位点上赖氨酸突变为丙氨酸、失去激酶活性的GSK3β突变质粒GSK3β-KD）转染细胞，观察肾脏纤维化的标志性分子纤维连接素蛋白（fibronectin， FN）表达水平的改变，以及对TGF-β/Smad信号通路的作用。 结果 LiCl增加HK-2细胞GSK3β的磷酸化，抑制GSK3β的活性，同时降低了细胞基础水平的和TGF-β1诱导的FN表达。过表达的GSK3β-WT增强TGF-β1诱导的FN表达，而这种效应在GSK3β-S9A转染细胞更为显著。反之，过表达GSK3β-KD则抑制TGF-β1诱导的FN表达。 分析对TGF-β/Smad信号通路的作用，LiCl可以抑制TGF-β1诱导的Smad3磷酸化，而对 Smad2磷酸化水平无影响。同时，LiCl也不改变Smad3的总蛋白表达。 结论 GSK3β通过TGF-β1/ Smad3信号通路促HK-2细胞纤维化，抑制GSK3β可以抗纤维化。 [关键词] 肾脏纤维化；GSK-3β；TGF-β1；smad3；信号通路 [中国法分类号] R692；R34 [文献标志码] A GSK3β plays pro-fibrogenic activity through TGF-beta/Smad signaling in renal tubular epithelial cells Kai Zhao1，2， Rujun Gong3， Shan Chen1， Fengtian He1 (Department of Biochemistry and Molecular Biology1， Department of Department of Pathogenic Biology2， College of Basic Medical Sciences， Third Military Medical University， Chongqing， 400038， China.；Division of Kidney Disease and Hypertension， Brown University School of Medicine， Providence， Rhode Island 02903， USA 2) [Abstract] Renal fibrosis is the final common pathway for many kidney lesions that lead to chronic progressive organ failure. In our previous study， it was observed that expression of glycogen synthase kinase-3 beta （GSK3β）， a serine/threonine kinase with multiple functions， is substantially increased in transplanted human kidney with chronic allograft neprophathy. And valproate （VPA）， a selective GSK3β inhibitor， markedly ameliorates renal fibrosis in rats with unilateral urethral obstruction. To address whether GSK3β plays direct roles in renal fibrosis， study reported here was carried out. In our results， GSK3β inhibitor LiCl decr