铁皮石斛F1代多糖与醇溶性浸出物变异规律探究.docxVIP

铁皮石斛Fl代多糖与醇溶性浸出物变异规律探究 ［摘要］采用苯酚-浓硫酸法和醇溶性浸出物热浸法 测定11个铁皮石斛F1代家系多糖和浸出物的含量，结果表 明5月与2月采集的样品多糖质量分数分别为32、89%?43、 07%, 25、77%?35、25%,醇溶性浸出物质量分数分别为2、 81%?4、85%, 7、90%?17、40%,家系间存在显著差异；多 糖含量低的亲本通过与多糖含量高的亲本杂交，能显著提高 子代多糖含量，杂交优势明显，杂交育种是提高铁皮石斛多 糖含量而进行品种选育的有效途径。采收时间显著影响铁皮 石斛多糖和浸出物含量，所有家系5月采样多糖含量均高于 2月，浸出物含量则相反，但不同家系变化幅度差别很大， 各个家系有其自身规律，研究铁皮石斛优良家系(品种)多 糖和浸出物积累规律，确定其最佳采收时间，对充分发挥优 良品种作用、提高药效具有重要意义。 ［关键词］铁皮石斛；种内杂交；多糖；浸出物 ［收稿日期］2013-04-04 ［基金项目］浙江省重大科技专项(2012C12912, 2011C12002) ［通信作者］*斯金平，教授，主要从事药用植物品种选 育，E-ma订：lssjp@163、com 铁皮石斛 Dendrobium officinale Kimura et Migo具有益胃生津、滋阴清热等功 效，多糖和醇溶性浸出物分别代表铁皮石斛的大极性和中小 极性主要成分，与药理作用有着密切的联系[1-6] o 2010年 版《中国药典》在“含量测定”项中规定干品铁皮石斛多糖 质量分数不得低于25、0%,甘露糖规定质量分数为13、0%? 38、0%,浸出物规定醇溶性浸出物不得低于6、5%[7]。本文 通过11个铁皮石斛F1代家系22个样品多糖和醇溶性浸出 物含量测定，了解铁皮石斛种内杂交F1代多糖和浸出物的 含量变异规律，为铁皮石斛良种选育提供依据。 1材料 紫外-可见分光光度计（Thermo Scientific GENESYS 10s UV-VIS）； KQ-500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器 有限公司）；DK-S24型电热恒温水浴锅（上海森信实验仪器 有限公司）；D-37520型高速离心机（德国Heraeus公司）； AB104-N电子分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）; DHG-9070HA精密型强制对流干燥箱（杭州蓝天化验仪器厂）。 葡萄糖对照品（购自中国食品药品检定研究院，批号 110833-200904）；重蒸酚（北京索莱宝科技有限公司）；其 他所用试剂均为分析纯，水为蒸饱水。 2012年5月1日和2013年2月6日，先后采集浙江省 义乌市佛堂镇高效生态农业示范园区丹溪药博园内6aX2b, 9X66, 17X30, 17X71, 30X83, 65X91, 78X69, 86X56, 99X31, 124X 140等10个Fl代全同胞家系和森山1号（CK） 二年生萌条（铁皮石斛萌藥生理年龄），共22个样品。每个 样品采样不少于25个萌条，1丛植株只采1个萌条，采样植 株间隔2 m以上。采集的样品在80匸杀青2 h, 60匸烘至 恒重，粉碎，过60目筛，待用。供试亲本主要性状详见表lo 2方法 2、1多糖含量测定 参照2010年版《中国药典》（一部） 苯酚-浓硫酸法进行测定［7］。精密称定样品粗粉0、3g,加 水200 mL,加热回流2 h,趁热过滤，将滤液转移至250 mL 量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，放 冷，加水至刻度，摇匀。精密量取续滤液5 mL,置50mL离 心管中，精密加入无水乙醇25 mL,摇匀，冷藏lh,取出， 离心（转速为4 000 r ? min-1） 20 min,弃去上清液，沉淀 加80%乙醇洗涤2次，每次20 mL,离心，弃去上清液，沉 淀加热水溶解，转移至50 mL量瓶中，放冷，加水至刻度， 摇匀。精密量取ImL样品溶液，加5%苯酚溶液lmL,混匀， 精密加浓硫酸5mL,混匀，静置5 min,沸水浴中加热20 min, 取出，置冰浴中冷却5 min,以1 mL水为空白，于488 nm 处比色，试验平行3次。以葡萄糖标样制作标准曲线，其回 归方程为 Y=8、911 4X-0、056 6, R2=0、998 4,其中，Y 为吸收度，X为浓度。 2、2浸出物含量测定 参照2010年版《中国药典》（一 部）附录VA项下热浸法测定，以乙醇作溶剂［7］。精密称定 样品粗粉2 g,置100 mL具塞圆底烧瓶中，精密加乙醇50 mL, 密塞，称重，静置1 h后，在85 °C热水浴中回流，保持微 沸1 h,放冷后取下量瓶，密塞，用乙醇补足失重，摇匀， 用干燥滤器滤过，精密量取滤液25 mL,置已干燥至恒重的 蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105 °C烘箱干燥