金线莲茎腐病菌生物学特性和5种杀菌剂对其抑制作用.docxVIP

金线莲茎腐病菌生物学特性和5种杀菌剂对 其抑制作用 ［摘要］采用十字交叉法和血球计数板法分别测定 不同培养温度、pH和光照条件对金线莲茎腐病菌菌丝生长状 况和产砲量的影响；用菌丝生长速率法测定5种杀菌剂对金 线莲茎腐病菌的抑制作用，为金线莲茎腐病的防治提供参 考。结果表明该病菌菌丝生长、产胞的最适温度都为28 °C, 最适生长的pH为6?7,且光暗交替可促进菌落的生长和产 胞。在5种杀菌剂中，戊口坐醇乳油的EC50为10. 02 mg ? L-1, 为多菌灵的92. 50倍；其次是膳菌哇和福星乳油，EC50分别 为91.23, 96. 68 mg?L-1。戊哇醇乳油对金线莲茎腐病菌的 抑制作用最强，防治效果较好。 ［关键词］金线莲；茎腐病菌；生物学特性；杀菌剂； 毒力测定 ［收稿日期］2013-09-16 ［基金项目］国家自然科学基金项目；浙江 省自然科学基金项目(LY13H280010)；国家级大学生创新创 业训练计划项目(201310341020) ［通信作者］邵清松，博士，副教授，主要从事药用植 物栽培与育种研究，Tel: (0571 ) E-mail： sqszjfc@126. com 金线莲 Anoectochilus roxburghii 又名金线兰、金丝 草，为兰科开唇兰属多年生名贵中药材，主产于福建、浙江、 台湾、江西、贵州等地，具有清热凉血、除湿解毒等功效， 用于治疗糖尿病、肾炎、急慢性肝炎等症，在民间享有“药 王”的美称［1-3］ o由于金线莲自然繁殖率低，对生态环境 要求严格，适应性较差，加之人工过度采挖，使得野生资源 锐减。近年来许多学者对金线莲人工栽培进行研究，在种苗 培育、组培苗移栽和设施栽培等关键技术取得突破性进展 ［4-5］ o金线莲茎腐病是由尖胞镰刀菌从茎基部侵染引起的, 病菌经由表皮、根毛或根茎侵入金线莲茎基部，是人工栽培 中主要的病害之一 ［6］。该病菌对金线莲不同生育期皆可造 成危害，其危害程度依株龄提高而递减，依病原菌浓度及温 度上升而增加［7］。发病时植株茎基部出现黄褐色水渍状病 斑，很快发展至绕茎一周，病部组织腐烂干枯溢缩呈线状。 病势发展迅速，幼苗迅速倒伏死亡，出现猝倒现象，发生严 重时为害率达90%,给种植户带来巨大的经济损失［6］。 国内外关于金线莲茎腐病综合防治研究报道较少。潘国 祥［8］研究表明在金线莲培养基中添加钙化合物，能降低金 线莲茎腐病发病率15%,且能有效的增加植株的株高和鲜重。 张淑芬等［9］利用栽培基质混拌木霉菌AHS06菌株，喷施 AHS06 菌株分生胞子制剂、Streptomyces saraceticus 31 制剂等方法防治金线莲茎腐病。蔡金池［10］研究发现TA菌 株胞子悬浮液处理，能诱导金线莲后天系统抗病性反应，从 而提高其防治茎腐病的能力。然而，目前生产上对该病害仍 以化学防治为主，常用多菌灵、百菌通、代森猛锌和甲基 托布津等杀菌剂，因连续多年使用这些药剂，防治效果逐 年降低，甚至达到无法控制的程度[11-12] o本研究对金线 莲茎腐病进行病原菌分离鉴定，并对其生物学特性、药剂毒 力进行研究，以期为全面了解和深入研究金线莲茎腐病菌的 发生规律和科学防治提供参考。 1材料与方法 1. 1药剂与菌株 1. 1. 1供试药剂50%多菌灵可湿性粉剂（四川国光农化 股份有限公司），40%福星乳油（氟硅哩，美国杜邦公司）， 72%农用硫酸链霉素可湿性粉剂（华北制药股份有限公司）， 25%戊哩醇乳油（上海艾科思生物药业有限公司），40%惰菌 哇可湿性粉剂（江门市大光明农化有限公司）。 1. 1.2供试菌株从浙江农林大学百草园采集金线莲染 病植株，参照张争等方法[13],从茎部病健交界处切取组织, 剪成小块，放入70%乙醇消毒30 s,然后将其转入0.1%升汞 消毒1 min,用无菌水清洗3遍后，用灭菌滤纸吸干，置于 马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基上。在28 °C黑暗条件下培 养，当菌落在培养基长出后，用灭菌的接种针挑取菌落边缘 的菌丝进行病原菌的初步纯化，将纯化后的菌株，再进行单 胞分离，在PDA试管斜面中培养好后，于4 ￡冰箱中保存 备用。纯化后的菌种培养5 d后镜检菌丝、胞子的形态，并 进行病原菌鉴定［14］ o 1.2菌株致病性的测定 采用针刺接种法对分离到的金线莲茎腐病菌菌株进行 致病性测定［15］ o取金线莲同一茎位的茎段，用微量进样器 针头刺破表皮，将直径2 mm的菌丝块接种于针刺点上，同 时以接种空白培养基为对照。共接种15个茎段，接种处理 完后放置于28 9保湿培养，3 d后观察并记录发病情况。 1.3金线莲茎腐病菌生物学特性观察 1.3. 1温度对金线莲茎腐病菌菌丝生长和产胞的影响 将直径为4