西瓜花叶病毒(WMV)外壳蛋白基因克隆及序列分析.pdfVIP

新疆农业科学2015，52(10)：1849—1858 Sciences XinjiaIlgA酣cultural doi：10．6048／j．issn．1001—4330．2015。010．013 西瓜花叶病毒(WMV)外壳蛋白 基因克隆及序列分析 何丹1，海利力·库尔班1，玉山江·麦麦提2，李继阳1，杨渡2，韩盛2 (1．新疆农业大学林学与园艺学院。乌鲁木齐830091；2．新疆农业科学院植物保护研究所，鸟鲁木齐830091) 摘要：【目的】研究新疆甜瓜主栽区西瓜花叶病毒(wMV)外壳蛋白的分类地位，以及与国内外分离株亲缘 关系。【方法】田间采集具有西瓜花叶病毒症状的幼嫩叶片，利用改良的删zoL总RNA提取法获取RNA，进 5．O 一步分离纯化、克隆及测序，将测序结果利用BLAST、DNAMAN5．O、CLUsTALx、MEGAExPASY、TM． HMM等软件进行碱基和氨基酸序列比对，以及疏水性平均值、脂肪系数、亲缘关系等分析。【结果】序列比对 发现8个地区wMV病毒外壳蛋白核酸序列的5’端保守性较高，碱基和氨基酸序列相似性分别达到86．25％ 和93．01％，存在部分碱基和氨基酸突变，相似性较高。【结论】通过分子进化树可得出新疆8个分离物之间 亲缘性关系较近，同源性较高，与国内外其它地区的亲缘性关系较远、同源性较低。 关键词：甜瓜；西瓜花叶病毒；夕p壳蛋白；序列分析 中图分类号：S436．5；s188文献标识码：A 文章编号：100l一4330(2015)10一1849—10 在我国新疆、山西、陕西、辽宁、黑龙江等地广泛分 O 引言 布1，一旦发生将严重影响甜瓜品质，造成减产 L．)是葫芦 【研究意义】甜瓜(cwum厶脱20 30％～50％，甚至绝收∞J。wMV主要以蚜虫作 科黄瓜属一年生蔓性草本植物，原产非洲和亚洲 热带地区，在中国、俄罗斯、西班牙、美国、伊朗、意 毒同时侵染甜瓜，造成混合感染[10‘11]，使其病情 大利、日本等国家普遍栽培，中国已有2000多年 的栽培甜瓜的历史，也是产量最高的国家¨o。从 2Mj，后来证实wMV—l实为PRSV的一个株系， 营养价值的角度看甜瓜不仅含有蛋白质、碳水化 合物、胡萝卜素、VB，、VB：、烟酸、钙、磷、铁等营养 的RNA基因组，有30111个碱基，具有单一的开 素，还含有可以将不溶性蛋白质转变成可溶性蛋 放阅读框(ORF)，其3末端和5末端各有一段非 白质的转化酶，而新疆作为中国甜瓜生产的优势 区域拉j，近年来，甜瓜病毒病日趋严重，2010—Anderson等首次在西瓜上发现该病毒【13’；张建新 2013年，北疆地区甜瓜病毒病的流行，造成了巨等怫1对WMV分离物的CP基因的核苷酸和氨基 大的经济损失。研究新疆wMV外壳蛋白基因对 酸同源性进行分析，其同源性分别为93．O％一 了解新疆该病毒分类地位以及与国内外分离株的 95．0％和96．5％～98．6％，其全基因组核苷酸序 亲缘关系有重要意义。【前人研究进展】西瓜花 列与法国一致性达到92．5％，证明不同地区的 叶病毒(wMV)是属于马铃薯Y病毒属，也是包wMV的CP蛋白基因存在一定的遗传多样性[121； 括甜瓜在内的葫芦科植物的重要病毒口“1，WMV1982年尹玉琦等u列在新疆哈密瓜上鉴定出 收稿日期：2015一03一18 基金项目：新疆农业科学院青年基金项目(xjnkq一2013033)；．中国科学院“西部之光”人才培养计划项目(YB2013ar7) 163．com 万方数据 1850 新疆农业科学 52卷 WMV，田间病株占90％以上【l叫；通过