菠菜霜霉病菌快速分子检测方法研究.pdfVIP

新疆农业科学2016，53(2)：346—351 Sciences Agricultural Xinjiang 1001—4330．2016．02．022 doi：10．6048／j．isstr 菠菜霜霉病菌快速分子检测方法研究 李京1”，张祥林1，王种1，李亚伟1，张小菊1 (1．新疆出入境检验检疫局，鸟鲁木齐830063；2．新疆农业大学农学院，-6睾木齐830052) 摘要：【目的】菠菜霜霉病，由专性寄生病原菌Peronosporafarinosafsp．苹，蹴妇引起，是世界上菠菜Spina- cia oleracea种植中最为重要的经济型病害。建立菠菜霜霉病菌快速分子检测方法。【方法】将菠菜霜霉病菌 进行显微镜的形态鉴定；提取DNA、PCR扩增、克隆、酶切、测序、序列比对与分析；采用巢式PCR技术检测菠 菜霜霉病：第一轮采用通用引物ITSl／ITS4，第二轮采用特异性引物SMPF／SMPR。【结果】该菌与霜霉属的形 态特征描述一致，确定菠菜患有霜霉病；测序结果经Blast比对分析与Peronosporaeff蛐a同源性达100％；巢式 PCR技术也特异性的检测到了菠菜霜霉病菌。【结论】建立针对菠菜霜霉病的快速分子检测技术。 关键词：菠菜霜霉病、酶切、巢式PCR 中图分类号：S41 文献标识码：A 文章编号：11301—4330(2016j02—0346—06 措施。【拟解决的关键问题】采用通用性引物 0 引言 ITSl／ITS4扩增ITS区，进而设计出针对菠菜霜霉 【研究意义】菠菜霜霉病是由专性寄生菌 病菌的特异性引物SMPF／SMPR。通过巢式PCR Peronosporafarinosa，sp．spi，lnc妣引起，该病在的方法来检测引物的特异性。 全世界的菠菜种植中都是一种毁灭性的病 1材料与方法 害u’2o。菠菜霜霉病是一种多发性真菌病害，尤 其在气候冷且多雨的情况下发病率高，传播速度 1．1 材料 快口】。【前人研究进展】对于菠菜霜霉病分子方 1．1．1 主要试剂 CHOI等H1 面的研究国外报道较多，Young—Joon 实验所用PCR试剂、所用引物与探针均购于 对引起菠菜霜霉病的病原Peronosporaeff凇a以及 北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司，植物基因 霜霉属的其他种结合病原的形态特征做了同源性 组DNA提取试剂盒、凝胶回收试剂盒、质粒提取 分析。Klosterman，S．J．等K1采用了ASP—PCR 试剂盒均购于天根生物科技(北京)有限公司， 的方法成功将引起菠菜霜霉病的病原PeronospomPMDl8一T载体购于大连宝生物工程公司，实验 舶口与引起甜菜霜霉病的病原Peronospora 所有的测序均在北京鼎国昌盛生物技术有限责任 schachtii检测出来。【本研究切入点】国内对于菠公司完成。 菜霜霉病的分子检测技术目前还没有相关报道， 1．1．2供试茵株(表1) 大部分报道是针对菠菜霜霉病的形态特征及防止 收稿13期：2015—09—20 基金项目：国家质检总局科研项目(201310091) 作者简介：李京(1990一)，女，山东人，硕士研究生，研究方向为植物检疫病害，(E—mail163．com 通讯作者：张祥林(1964一)，男，新疆人，研究员，研究方向为分子植物病理学，(E—mail)XL6479@163．corn 万方数据 李京等：菠菜霜霉病茵快速分子检测方法研究 347