临床微生物学和微生物学检验.ppt

5．对接收的标本、无菌器具、用过的物 品等应明显分开井放在指定位置。同 时要对用过的物品及时进行灭菌处理。 6．细菌室应有当地的气温特点的消防设 备。 * PPT课件 (二)无菌实验室 1．无菌室应完全封闭，人员出入应 有两道门，其间应隔有 缓冲区。 2．用前应以紫外线消毒30min，定期 用乳酸或甲醛熏蒸，彻底消毒。 * PPT课件 3．在无菌室中一般仅限于分装无菌的 培养基及传染性强的细菌的接种， 不进行有菌标本的分离及其他操作。 4．无菌室内应仅限操作人员进人，而且 进入无菌室应着隔离衣和专用鞋，操 作时戴口罩，随时保证室内的无菌状 态。 * PPT课件 5．条件有限的实验室，可用超净工作台 代替无菌实验室进行相应的操作。超 净工作台应选择垂直气流通风方式。 6．无菌室应配备空调设备，保证不因室 温而影响工作。 * PPT课件 (三)基本设备和器具 用于细菌培养的温箱、C02培养箱、厌氧 培养设备； 用于观察细菌形态及标本直接镜检的显 微镜； 用于物品灭菌的高压蒸气灭菌器、干烤 箱； * PPT课件 用于储存培养基、诊断用血清、抗生素 及菌种等的冰箱和冷藏柜； 用于挑取标本、接种等的接种器具，包 括接种环和接种针；制备培养基时用的pH计； 用于接种器具灭菌的火焰灯或酒精灯； 还有各种必用的平皿、试管、吸管等玻璃器 皿，以及离心机、天平等。 * PPT课件 二、培 养 基 由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖 使用的混合营养物制品。 适宜的培养基不仅可用于细菌的分离纯化培养、 传代、菌种保存，还可用于研究细菌的生理、 生化特性，是对病原菌分离鉴定的重要环节和 必不可少的手段。 * PPT课件 (一)培养基的组成成分 1.营养物质: (1)蛋白胨；(2)肉浸液；(3)牛肉膏；(4)糖类；(5)血液；(6)无机盐类； (7)鸡蛋和动物血清；(8)生长因子：提供细菌生长繁殖所需要的氮源和碳源，还有生长因子。 2.凝固物质 制备固体培养基时，加入琼脂，琼脂是半乳糖胶，98℃以上时可溶于水，在45 ℃以下则凝固成凝胶状态。 3.抑制剂和指示剂 用于选择、鉴定及判断结果。 * PPT课件 (二)培养基种类 1．基础培养基 含有生长所需的基本营 养成分，称肉汤，用于增菌、检验， 是制备其他培养基的基础成分。 2．营养培养基 在基础培养基中可加入 葡萄糖、血液、生长因子等特殊成分， 供营养要求较高的细菌和须要特殊生 长因子的细菌生长。最常用的是血平 板等。 * PPT课件 3．鉴别培养基 利用细菌分解能力及代 谢产物的不同，在培养基中加入特定 的作用底物和指示剂，观察细菌生长 过程中分解底物所释放的不同产物， 通过指示剂的反应不同来鉴别细菌。 如糖发酵培养基。 * PPT课件 4．选择培养基 在培养基中加入抑制剂而 抑制杂菌生长，有助于对所选择的细菌 生长。 5．特殊培养基包括厌氧培养基和细菌L型 培养基等。 * PPT课件 (三)分离培养基的选择 依据卫生部临床检验中心推荐，应备有 如下分离培养基： 1．血平板 适于各类细菌的生长。 2．巧克力血平板 其中含有V和X因子， 适于接种疑有嗜血杆菌、奈瑟菌等的 标本。 * PPT课件 3．中国蓝平板或伊红美蓝平板 有选择地 促进G_菌生长，是较好的弱选择性培养 基。 4．麦康凯平板 具中等强度选择性，是非 发酵菌鉴定的依据。 5．SS琼脂 有较强的抑菌力，用于志贺菌 和沙门菌的分离。 * PPT课件 6．碱性琼脂 用于从粪便中分离霍乱弧菌 及其它弧菌。 7．血液增菌培养基 用于从血液、骨髓中 分离常见病原菌。 8．营养肉汤 用于标本及各类细菌的增菌。 * PPT课件 三、细菌接种与分离技术 (一)平板划线分离法 1．连续划线分离法 此法主要用于 杂菌不多的标本。 2．分区划线分离法 本法适用于杂 菌量较多的标本。获得单个菌落。 * PPT课件 (二)斜面接种法 该法主要用于单个菌落的纯培养、 保存菌种或观察细菌的某些特性。 (三)液体接种法 多用于一些液体生化试验管的接种。 (四)穿刺接种法在试管内壁与液面交接处 的此法主要用于半固体培养基、明胶 及双糖管的接种。 * PPT课件 (五)倾注平板法 测定牛乳、饮水和尿液等标本细菌数 时常用此方法。 (六)涂布接种法 常用于纸片法药物敏感性测