过氧化氢对人牙髓细胞氧化还原状态的影响-口腔医学专业论文.docxVIP

原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者：尹勿儋影参为 日期：w／。年岁月谚日 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大 学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有 关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权 郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用 影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、 使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍 然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者：初修跄 Ftgq：Ⅵ／。年}月够日 摘要摘要 摘要 摘要 目的： 牙齿美自技术已经有一百多年的历史，随着审美水平的不断提高，牙齿美白 日益受到人们的青睐。虽然漂白剂已经有了较多改进，但是其主要成分始终是高 浓度的过氧化氢(hydrogen perox ide，H：0。)，通过H。02分解、形成大量的超氧化 物自由基而发挥漂白作用，近年来，为更快达到漂白效果，漂白剂的浓度有增高 趋势，其安全性∑直受到人们的关注。如漂白后的牙齿出现不同程度的过敏症 状。研究证实，H。02具有细胞毒性n1，引起人牙龈成纤维细胞还原型谷胱甘肽减少 脚，对细胞形态学和活性有显著影响跚。H。02和过氧化脲能够渗透牙釉质和牙本 质并进入髓腔H1，髓腔内的酶类明显被抑制∞1，但没有造成不可逆性损伤∞1。H。0： 能否引起人牙髓细胞氧化还原状态的变化尚未见报告。 因此，本研究以体外培养的人牙髓细胞氧为研究对象，以人牙髓细胞内氧 化型、还原型谷胱甘肽和氧化型、还原型辅酶II的含量为指标，同时检测H。0。对 人牙髓细胞活性和形态学的影响，从而可能为评估H。0：的安全性提供新方法，为 漂白过程中采用低浓度的漂白剂和采取防护措施提供理论依据。 方法： l、本研究采用组织块酶消化法培养人牙髓细胞；使用免疫细胞化学法对所培养 细胞进行鉴定；使用550酶标仪测定其吸光度(A)值；使用苏木素一伊红染色法 对人牙髓细胞进行染色并观察其形态学变化。 2、使用高效液相色谱法检测H。0。作用后人牙髓细胞内GSH和GSSG的含量，并进一 步得出GSSG／GSH的比值。 3使用分光光度法检测H。0。作用后人牙髓细胞内NADPH和NADP+的含量，并进一步得 出NADP+／NADPH的比值。 结果： 1、人牙髓细胞的培养及H：0。对人牙髓细胞活性和形态学的影响 本实验采用组织块酶消化法成功培养出人牙髓细胞并顺利传代。经免疫细胞 化学鉴定，提示细胞为间叶组织来源。 将人牙髓细胞种于96孔板，分组处理后加入10 ul CCK一8试剂，550酶标 仪在450 nm波长下测定吸光度(A)值。随着H20。浓度增高，特别是0。4 mM H20。 组，作用时间延长，人牙链细胞活性显著下降。 将人牙髓细胞种于24孔板，分组处理后进行苏木素一伊红染色(HE染色)。 0．1 IIlM H。0。作用1-2h，光镜下未见细胞形态有明显变化，4h时，光镜下见细胞 摘要体积稍变小，细胞之间出现小间隙。0．2-0．4 摘要 体积稍变小，细胞之间出现小间隙。0．2-0．4 mM H20：作用1-4 h，光镜下见细胞 体积变小变圆，有的形成囊泡，细胞膜失去完整性，细胞之间失去正常的连 接，有的细胞发生溶解，并随浓度和作用时间的延长而愈加明显。 特别是0．4 IIlM H。02组，人牙髓细胞体积萎缩，细胞核与细胞质比例失调，大部分细胞膜裂 解，细胞死亡，细胞数量显著减少。 2、H202对人牙髓细胞内GSH、GSSG及GSSG／GSH的影响 0．1删H20：组，GSH浓度随作用时间延长而降低，GSSG随作用时间延长而升 高，GSSG／GSH随作用时间延长而升高。0．2 IIlM和0．4 IIlM H。02组，GSH和GSSG 浓度随作用时间延长而降低，GSSG／GSH随作用时间延长而升高，提示人牙髓细 胞的的氧化还原状态向氧化方向偏移，但是0．4 mM H。02作用时间为4 h时，样 本中没有检测到GSH和GSSG。 3、H：O：对人牙链细胞内NADPH、NADP+及NADP+／NADPH的影响 0．1 mM H202组，NADPH浓度随作用时间延长而降低，NADP+随作用时间延长而 升高，NADP+／NADPH随