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2012年7月 中国粮油学报 V01．27．No．7 oftheChineseCerealsandOiLAssoeiation Jul．2012 第27卷第7期 Journal 利用显色法快速筛选大豆脂肪氧化酶缺失突变体 董德坤1 姜 莹1’2 傅旭军1 黄英运1 袁凤杰1 朱丹华1 (浙江省农业科学院作物与核技术利用研究所1，杭州310021) (深圳华大基因研究院2，深圳518083) 摘要以杭州国家大豆改良分中心保存的野生和栽培大豆资源为研究材料，利用显色法对大豆脂肪氧 同时表明显色法是一种简便快速的大豆脂肪氧化酶缺失突变体筛选方法。 关键词 大豆脂肪氧化酶突变体显色法 中图分类号：$565．1文献标识码：A 文章编号：1003—0174(2012)07一0110—05 大豆脂肪氧化酶(Lipoxygenas，ECl．13．11．12，缺失种质用于优良品种的选育将是一种十分有效的 简称Lox)是一类含非血红素铁、不含硫的蛋白质，分解决豆腥味问题的途径。 子质量为94—97ku。在成熟大豆种子中约占总蛋 本试验采用显色法对杭州国家大豆改良分中心 白的1％～2％。它能催化具有顺，顺一1，4一戊二烯保存的野生和栽培大豆种质进行分析筛选，以期获 结构的多元不饱和脂肪酸的加氧反应，如亚油酸、亚 得大豆脂肪氧化酶缺失的优良种质。 麻酸等生成具有共轭双键的脂肪酸氢过氧化物，如 乙醛和茉莉酮酸脂等，这些挥发性物质导致大豆及 1 材料与方法 其制品产生豆腥味¨-3J。TheoreH等。40和Chfistopher 1．1试验材料 等¨o先后分离纯化了大豆脂肪氧化酶的3种同功酶 从浙江省农业科学院杭州国家大豆改良分中心 lax一1、Lox2和Lox3(Lox3a、Lo,,3h)。在形成豆制品 保存的野生和栽培大豆资源中随机选取348份种质 挥发性气味物质和豆腥味物质中，k也起主要作用， 用于脂肪氧化酶缺失突变体的筛选。 Loxl和Lo】【3作用相对较小旧“1。bx2缺失时豆腥 大豆脂肪氧化酶缺失对照分别为：脂肪氧化酶 味明显降低，kx2和Lox3同时缺失几乎没有豆腥 味，当Lox全缺失时根本不产生豆腥味一1，并且Lox Lox3缺失品种‘五星一号’记为LI；k】【2缺失品种 的缺失对大豆的性状并无显著影响。…J。 ‘五星二号’记为L13。其中‘五星一号’和‘五星二 大豆加工过程中消除大豆脂肪氧化酶的主要手 号’由河北省农业科学院张孟臣研究员惠赠。 段包括高温加热处理、微波处理、有机溶剂萃取和水 1．2试剂与溶液配制 解酶处理等¨¨。但是在处理的过程中大豆蛋白质品 亚油酸、吐温、次甲基蓝、二硫苏糖醇(DTI)、硼 质会受到影响，其溶解度、黏性等特性降低或丧失； 砂、硼酸磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、Tween20：上海生 其他营养成分如维生素等也会受到破坏；同时加工 工生物工程技术有限公司；B一胡萝卜素：Sigma— 的过程还增加了能量的消耗和生产成本的投入。而 Aldfieh公司；其他试剂均为分析纯。 研究表明，使用L艇缺失大豆制作的豆制品不仅豆腥 SLS(亚油酸钠底物)溶液：分别称取70．0nlg亚 味低，而且具有较高的蛋白质水平、VE含量和清除 油酸钠和70．0 Tween20，将其溶于4．0mL水中， nag DPPH自由基的活性-l“。因而筛选大豆脂肪氧化酶 mL0．5